sull'uso del kit di reagenti
per l'estrazione del DNA da materiale biologico
"DNA-sorb-SM"
Amplisenso
FBUN Istituto centrale di ricerca di epidemiologia
Rospotrebnadzor,
Solo per ricerca
Federazione Russa, 111123,
e altri scopi non medici
Mosca, via Novogireevskaya, 3A
ELENCO DELLE ABBREVIAZIONI
SCOPO
PRINCIPIO DEL METODO
MODULI PACCHETTO
ESTRAZIONE DEL DNA DA MATERIALE BIOLOGICO DA ANIMALI.................................. 8
CIBO ANIMALE O CIBO VEGETALESIMBOLI UTILIZZATI NEI PRODOTTI STAMPATI
Modulo 1: REF К1-6-50-Mod / VER 27.12.16 / pagina 2 di 15
In questo manuale vengono utilizzate le seguenti abbreviazioni e simboli:
DNA - acido desossiribonucleico NA - acidi nucleici TC - controllo di estrazione negativo NCO - campione di controllo negativo PC - controllo di estrazione positivo PKO - campione di controllo positivo PCR - reazione a catena della polimerasi
– federale organizzazione finanziata dallo Stato scienza
L'estrazione del DNA è una procedura preanalitica del metodo PCR.
Volume del campione per l'estrazione: 100 µl (possono essere testati campioni con un volume da 10 a 100 µl o un peso da 10 a 100 mg)1.
ATTENZIONE! Per informazioni sulla procedura di raccolta, le condizioni di trasporto e conservazione del materiale di prova, la necessità e la procedura per prepararlo per l'estrazione del DNA, nonché informazioni sulle sostanze interferenti e le restrizioni associate al campione, consultare le istruzioni del kit di reagenti di amplificazione utilizzato .
Per alcuni tipi di materiale biologico è richiesta una fase di preparazione del campione. Centimetro.
istruzioni per il kit di reagenti di amplificazione utilizzato.
Modulo 1: REF K1-6-50-Mod / VER 27.12.16 / pagina 3 di 15 mediante centrifugazione e successivo lavaggio del sorbente. Quando il tampone di eluizione viene aggiunto al sorbente, l'NC passa dalla superficie della silice alla soluzione, che viene separata dalle particelle di sorbente mediante centrifugazione. Come risultato di questa procedura, si ottiene una preparazione di NA altamente purificata, priva di inibitori della reazione di amplificazione, che garantisce un'elevata sensibilità analitica dello studio PCR.
Il kit di reagenti è disponibile in 2 configurazioni:
La Forma 1 include un set di reagenti "DNA-sorb-S-M" opzione 50.
La Forma 2 include un set di reagenti "DNA-sorb-S-M" versione 100.
Quando si studiano prodotti alimentari, additivi biologici, mangimi per animali o materie prime vegetali, il lavoro deve essere svolto in conformità con i requisiti delle linee guida MU 1.3.2569-09 "Organizzazione del lavoro dei laboratori che utilizzano metodi di amplificazione dell'acido nucleico quando si lavora con materiale contenente microrganismi dei gruppi di patogenicità I-IV "e GOST R 53214-2008" Prodotti alimentari. Metodi di analisi per la rilevazione genetica organismi modificati e prodotti da essi derivati.
Requisiti generali e definizioni”.
Quando si lavora, è necessario rispettare sempre i seguenti requisiti:
– Il processo di laboratorio dovrebbe essere unidirezionale. L'analisi viene eseguita in stanze separate (zone). Il lavoro dovrebbe iniziare nella zona di estrazione e continuare nella zona di amplificazione e rilevamento. Non restituire campioni, apparecchiature e reagenti nell'area in cui è stata eseguita la precedente fase del processo.
– Reagenti non utilizzati, reagenti con è scaduto e Modulo 1: REF K1-6-50-Mod / VER 27.12.16 / page 4 of 15 reagenti usati, imballaggi3, materiale biologico, inclusi materiali, strumenti e oggetti contaminati con materiale biologico, devono essere smaltiti in conformità con i requisiti del SanPiN 2.1.7.2790-10 “Prescrizioni sanitarie ed epidemiologiche per la gestione dei rifiuti sanitari”.
– Utilizzare e sostituire ad ogni operazione puntali monouso per pipette automatiche con filtro4. Gli utensili di plastica usa e getta devono essere gettati in un apposito contenitore contenente un disinfettante che può essere utilizzato per decontaminare i rifiuti sanitari.
– Gli utensili (mortai e pestelli) e gli strumenti metallici (bisturi, forbici, pinzette, accessori per frullatore, ecc.) utilizzati per la preparazione del campione vengono conservati in una soluzione disinfettante (ad esempio, soluzione di sale sodico con acido dicloroisocianurico allo 0,2%) entro un'ora, lavare acqua di rubinetto con detergenti tensioattivi e, dopo lavaggio in acqua corrente e deionizzata, essiccato in stufa a secco per 4 ore alla temperatura di 180 C.
– Il kit di reagenti è monouso per testare il numero specificato di campioni (vedere la sezione "Composizione").
– Il kit di reagenti è pronto per l'uso secondo queste istruzioni.
Utilizzare il kit di reagenti esclusivamente per lo scopo previsto.
– Non utilizzare il kit di reagenti se la confezione interna è rotta o aspetto esteriore il reagente non corrisponde alla descrizione.
– Non utilizzare il kit di reagenti se non sono state rispettate le condizioni di trasporto e conservazione secondo le istruzioni.
I reagenti non utilizzati, i reagenti scaduti, i reagenti usati, gli imballaggi sono classificati come rifiuti sanitari di classe G.
I puntali monouso senza filtro vengono utilizzati per rimuovere il supernatante durante l'estrazione con un aspiratore a vuoto.
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– Non utilizzare il kit di reagenti oltre la data di scadenza.
– Utilizzare guanti monouso senza talco, camici da laboratorio e protezioni per gli occhi durante la manipolazione di campioni e reagenti. Lavarsi accuratamente le mani a fine lavoro. Tutte le operazioni vengono eseguite solo con guanti per evitare il contatto con il corpo umano.
– Evitare l'inalazione dei vapori, il contatto con la pelle, gli occhi e le mucose, non ingerire. In caso di contatto, sciacquare immediatamente la zona interessata con acqua, se necessario consultare un medico. cure mediche.
– Le schede di sicurezza dei reagenti (SDS) sono disponibili su richiesta.
Valutazione di eventi probabili, a seguito dei quali possono verificarsi conseguenze negative per il corpo umano:
Se utilizzato per lo scopo previsto e seguendo le precauzioni di cui sopra, è escluso il contatto con il corpo umano.
In situazioni di emergenzaè possibile quanto segue:
- irritazione della mucosa degli occhi nelle persone sensibili,
– irritazione cutanea in persone sensibili,
- reazione allergica,
- danno per inalazione,
- danno se assunto per via orale.
Effetti specifici del kit di reagenti sul corpo umano:
– Nessun effetto cancerogeno.
- Non c'è effetto mutageno.
– Nessuna tossicità riproduttiva.
1. Provette in polipropilene monouso da 1,5 ml e 5,0 ml o con tappo a tenuta (ad es., Axygen, Inc.
(Exgen, Inc.), USA o equivalente).
2. Puntali monouso per pipette a volume variabile con filtro fino a 200 e fino a 1000 µl (ad esempio, Axygen, Inc. ("Exgen, Inc."), USA o simile).
3. Puntali monouso per pipette a volume variabile fino a 200 µl (ad esempio, Axygen, Inc. ("Exgen, Inc."), USA o simili).
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4. Rack per provette da 1,5 ml (ad esempio, Axygen, Inc. ("Exgen, Inc."), USA o simile).
5. Scatola laminare, classe di sicurezza biologica II tipo A (ad esempio, "BAVp-01-"Laminar-S"-1.2", CJSC "Laminar Systems", Russia o simili).
6. Termostato per provette tipo "Eppendorf" da 25 a 100 °C (ad esempio SIA Biosan, Lettonia o simili).
7. Agitatore termostatico per provette tipo Eppendorf da 25 a 100 °C (ad esempio TS-100, SIA Biosan, Latvia o simili).
8. Microcentrifuga per provette tipo "Eppendorf" con velocità massima centrifugazione di almeno 12 mila g (ad esempio, MiniSpin, Eppendorf ("Eppendorf Manufacturing Corporation"), Manufacturing Corporation Germany o simili).
9. Vortex (ad esempio, SIA Biosan, Lettonia o simili).
10. Aspiratore sottovuoto medicale con pallone trappola per rimuovere il supernatante (ad esempio, OM-1, OOO Utes, Russia o simili).
11. Distributori automatici di volume variabile (ad esempio, Biohit LLC, Russia o simili).
12. Frigorifero da 2 a 8 °С con congelatore da meno 24 a meno 16 С.
13. Una vestaglia separata, berretti, scarpe e guanti monouso secondo MU 1.3.2569-09.
14. Usa e getta contenitori di plastica per il rilascio e l'inattivazione dei materiali.
– – –
2. Selezionare il numero richiesto di provette monouso in polipropilene da 1,5 ml con tappi a vite o a tenuta stagna (compresi i controlli di estrazione negativi e positivi, se forniti per lo studio PCR).
Quando si conserva il tampone di lisi e la soluzione di lavaggio 1 a una temperatura compresa tra 2 e 8°C, si può formare un precipitato sotto forma di cristalli.
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3. Aggiungere 10 µl di VKO6 a ciascuna provetta (se prevista per il test PCR). Aggiungere 400 µl di tampone di lisi e 17 µl di tampone di lisi alle provette.
4. Dispensare 100 µl di campioni di analisi6 in provette preparate, utilizzando un puntale con filtro separato per ciascun campione.
ATTENZIONE! 400 µl di tampone di lisi e 17 µl di reagente di lisi possono essere aggiunti alla provetta con la quantità richiesta di campione e 10 µl di BKO7 (se previsto per lo studio PCR) possono essere aggiunti alla stessa provetta utilizzando puntali con filtro separati.
5. Aggiungere 100 µl di OKO alla provetta di estrazione del controllo negativo (TC), aggiungere 90 µl di OKO e 10 µl di FKO alla provetta di estrazione del controllo positivo (PC) (se sono forniti controlli di estrazione per condurre studi PCR).6
6. Chiudere bene i coperchi, mescolare accuratamente e vortexare le gocce.
Collocare le provette in un termostato a 64°C per 1 ora, agitando periodicamente su vortex (5 volte ogni 10–12 min). L'incubazione è consentita per 12 ore a 60 °C.
7. Sedimentare le particelle di campione non disciolte mediante centrifugazione per 5 minuti a 10 kg (ad es. 12 krpm per la microcentrifuga MiniSpin, Eppendorf Manufacturing Corporation).
8. Rimuovere il supernatante in un volume di 200-350 µl con molta attenzione (evitando l'ingresso di particelle sospese e goccioline di grasso) con puntali separati con filtri e trasferirli in nuove provette. Sistemare le gocce sul vortice.
9. Risospendere il sorbente universale mescolando intensamente su un vortice. Aggiungere 25 µl di assorbente universale risospeso a ciascuna provetta con una punta separata, chiudere bene i coperchi.
Vortice, lasciare in una griglia per 10 minuti, mescolando ogni 2 minuti.
È consentito modificare il volume dei campioni di test e di controllo, vedere le istruzioni del kit di reagenti di amplificazione utilizzato.
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18. Ripetere la procedura di lavaggio, seguendo i paragrafi. 15–16, rimuovere completamente il surnatante.
19. Posizionare le provette con i coperchi aperti in un termostato a 64 °C per 5–10 minuti per asciugare il sorbente universale.
20. Aggiungere 50–100 µl di tampone di eluizione B alle provette (vedere le istruzioni del kit di reagenti di amplificazione utilizzato).
Agitare su vortex fino a quando il sorbente non è completamente risospeso. Mettere in un termostato con una temperatura di 64 °C per 5-10 minuti, periodicamente (1 volta al minuto) mescolando su un vortice.
Il DNA purificato può essere conservato a una temperatura compresa tra 2 e 8 °C per una settimana, a una temperatura compresa tra meno 24 e meno 16 °C per 6 mesi e a una temperatura non superiore a meno 68 °C per un anno. Per fare ciò è necessario, senza catturare il sorbente, trasferire il surnatante in una nuova provetta.
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1. Riscaldare il tampone di lisi e la soluzione di lavaggio 1, se conservata tra 2 e 8°C, a 64°C finché i cristalli non sono completamente dissolti.
2. Posizionare provette da 1,5 ml con campioni di test pretrattati in un rack (vedere le istruzioni per il kit di reagenti di amplificazione utilizzato per il volume/quantità del campione).
3. Preparare una provetta monouso in polipropilene da 1,5 ml con tappo a vite o un controllo di estrazione negativo (EC) aderente. Aggiungere 100 µl di OKO nella provetta.
4. Aggiungere 400 µl di tampone di lisi e 17 µl di reagente di lisi nelle provette e negli OC.
5. Chiudere bene i coperchi, mescolare accuratamente e vortexare le gocce.
Collocare le provette in un termostato a una temperatura di 64 °C per 1 ora, agitando periodicamente su vortex (5 volte ogni 10-12 min) o utilizzare un agitatore termostatico.
6. Sedimentare le particelle di campione non disciolte mediante centrifugazione per 5 minuti a 10 kg (ad es. 12 krpm per la microcentrifuga MiniSpin, Eppendorf Manufacturing Corporation).
7. Selezionare il numero richiesto di nuove provette monouso in polipropilene da 1,5 ml con tappi a vite oa tenuta stagna.
8. Risospendere il sorbente universale mescolando intensamente su un vortice. Aggiungere 25 µl di assorbente universale risospeso a ciascuna provetta con una punta separata, chiudere bene i coperchi.
9. Dalle provette con i campioni lisati, rimuovere il liquido supernatante in un volume di 200–350 µl con molta attenzione (evitando l'ingresso di particelle sospese e gocce di grasso) utilizzando puntali separati con filtri e trasferirli nelle provette con un sorbente. Vortice, lasciare in una griglia per 10 minuti, mescolando ogni 2 minuti.
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10. Centrifugare le provette in una microcentrifuga per 1 minuto a 2 kg (ad es. 5 krpm per la microcentrifuga MiniSpin, Eppendorf Manufacturing Corporation).
11. Senza afferrare il sorbente, rimuovere il surnatante da ciascuna provetta con un puntale separato da 200 µl senza filtro utilizzando un aspiratore a vuoto.
12. Aggiungere 300 µl di soluzione di lavaggio 1 alle provette, chiudere bene i coperchi, vortexare fino a quando il sorbente universale non è completamente risospeso.
13. Centrifugare le provette in una microcentrifuga per 1 min a 2.000 g.
14. Senza afferrare il sorbente, rimuovere il supernatante da ciascuna provetta con un puntale separato da 200 µl senza filtro utilizzando un aspiratore a vuoto.
15. Aggiungere 500 µl di soluzione di lavaggio 2 alle provette, chiudere bene i coperchi, mescolare su vortex fino a quando il sorbente universale non è completamente risospeso
16. Centrifugare le provette in una microcentrifuga per 1 min a 7 kg (ad es. 10 krpm per una microcentrifuga MiniSpin, Eppendorf Manufacturing Corporation).
17. Senza afferrare il sorbente, rimuovere il surnatante da ciascuna provetta con un puntale separato da 200 µl senza filtro utilizzando un aspiratore a vuoto.
18. Ripetere la procedura di lavaggio, seguendo i paragrafi. 15-16, rimuovere completamente il supernatante.
19. Mettere le provette con i coperchi aperti in un termostato con una temperatura di 64 °C per 5-10 minuti per asciugare il sorbente universale.
20. Aggiungere alle provette 50 µl di tampone di eluizione B. Vortexare fino a quando il sorbente non è completamente risospeso. Mettere in un termostato con una temperatura di 64 °C per 5-10 minuti, periodicamente (1 volta al minuto) mescolando su un vortice.
21. Centrifugare le provette in una microcentrifuga per 1 min a 10 mila g. Il supernatante contiene DNA purificato. I campioni sono pronti per la PCR.
Il DNA purificato può essere conservato a una temperatura compresa tra 2 e 8 °C per una settimana, a una temperatura compresa tra -24 e -16 °C per 6 mesi e a una temperatura Forma 1: REF K1-6-50-Mod / VER 27.12 .16 / pagina 12 di 15 non superiore a meno 68 °С durante l'anno. Per fare ciò è necessario, senza catturare il sorbente, trasferire il surnatante in una nuova provetta.
Trasporto. Un set di reagenti deve essere trasportato a una temperatura compresa tra 2 e 8 C per non più di 5 giorni in contenitori termici contenenti impacchi di ghiaccio da tutti i tipi di veicoli coperti. Al ricevimento, smontare in base alle temperature di stoccaggio specificate.
Magazzinaggio. Conservare il kit di reagenti a una temperatura compresa tra 2 e 25 C, ad eccezione del reagente di lisi. Conservare il reagente di lisi in frigorifero a una temperatura compresa tra 2 e 8 C.
Le camere di refrigerazione devono fornire un regime di temperatura regolato.
Il metodo di estrazione rapida del DNA in microcolonna è progettato per isolare il DNA totale da sangue, plasma, saliva, urina, colture cellulari e qualsiasi pellet cellulare nel tampone. L'elevata purezza del DNA isolato ne consente l'utilizzo per tutti i tipi di analisi.
il tempo di isolamento va da 30 a 45 minuti a seconda del numero di campioni;
Utilizzando i kit per l'estrazione del DNA genomico della serie DNA-Extran, è possibile isolare il DNA da una varietà di materiale biologico: sangue, colture di cellule batteriche e animali, tessuti freschi, congelati o essiccati di animali e piante.
Adatto per l'isolamento del DNA di micobatteri da espettorato, lavaggi bronchiali, liquido cerebrospinale, essudato, puntiforme, biopsia, urina, secrezioni del tratto genitale, colture cellulari. L'elaborazione preliminare del materiale clinico viene eseguita secondo le procedure standard per la preparazione dei campioni negli studi microbiologici (Ordine n. 109 del Ministero della Salute della Federazione Russa del 21 marzo 2003 "Sul miglioramento Federazione Russa", Appendice 11 "Istruzioni sui metodi unificati di ricerca microbiologica per l'individuazione, la diagnosi e il trattamento della tubercolosi"). Per inattivare il materiale clinico, si consiglia di utilizzare la nostra soluzione inattivante A.
La soluzione A uccide i micobatteri entro 12 ore e disinfetta il materiale clinico che può essere utilizzato per ulteriori analisi (estrazione del DNA, PCR, ecc.). La soluzione A è adattata specificamente per il trattamento dell'espettorato e sostituisce completamente la procedura standard utilizzando la soluzione NaOH-NALC, ha eccezionali proprietà mucolitiche. La soluzione di inattivazione A aumenta la resa del DNA rispetto alla preparazione standard del campione NaOH-NALC.
La procedura di isolamento include: lisi del DNA con isotiocianato di guanidina, assorbimento del DNA su particelle magnetiche, sedimentazione del DNA mediante centrifugazione, fasi di lavaggio ed eluizione del DNA. Può essere utilizzato per isolare il DNA di altri microrganismi.
l'utilizzo di particelle magnetiche rivestite di gel di silice come sorbente è un formato tecnologicamente più avanzato e conveniente rispetto ad altri sorbenti, consente la massima standardizzazione e automazione della procedura di estrazione del DNA;
un controllo positivo interno (IPC) viene aggiunto a ciascun campione del test, la presenza/assenza di inibitori della RT-PCR e l'efficienza dell'estrazione del DNA sono giudicate dalla reazione di amplificazione IPC.
I kit di reagenti "Sorb-GMO-A" e "Sorb-GMO-B" sono progettati specificamente per l'estrazione del DNA da materiali vegetali, alimenti e mangimi. Entrambi i kit di purificazione del DNA utilizzano assorbenti al silicio. "Sorb-GMO-A" contiene cloruro di guanidina come agente lisante, "Sorb-GMO-B" contiene un detergente ionico STAB, che fornisce la massima resa di DNA dai componenti vegetali. Caratteristiche distintive del kit "Sorb-GMO-A" sono la velocità di estrazione del DNA e l'assenza di cloroformio, che rende il lavoro con il kit più sicuro.
Progettato per isolare il DNA della Legionella dai corpi idrici ambiente(torri di raffreddamento, piscine, parchi acquatici, sistemi di approvvigionamento di acqua calda e fredda). La concentrazione minima recuperata di Legionella è di 100 cellule per 0,5 L di campione.
Il set "M-Sorb-Leg" è prodotto in due modifiche: "M-Sorb-Leg1000" per campioni d'acqua con un volume di 1-1000 ml e "M-Sorb-Leg1" per campioni d'acqua fino a 1 ml. Il set M-Sorb-Leg1000 prevede la filtrazione dell'acqua mediante un filtro in policarbonato.
un set di reagenti "M-Sorb-Leg" consente di eliminare gli inibitori della PCR presenti in campioni di acqua altamente contaminati;
Il kit di reagenti M-Sorb-OOM è progettato per isolare il DNA da oggetti ambientali (suolo, acqua, cadaveri di animali, ecc.) sospettati di essere infetti da microrganismi altamente pericolosi (OOM), al fine di prepararli per la successiva analisi mediante reali- tempo PCR. La procedura di estrazione è simile a quella descritta per il set M-Sorb-Leg.
Il kit è destinato all'isolamento dell'RNA da sangue, frammenti di tessuto, colture cellulari. L'RNA ottenuto utilizzando il kit RNA-Extran può essere utilizzato sia per RT-PCR che per analisi di ibridazione, traduzione in vitro e clonazione.
Il principio dell'isolamento dell'RNA si basa sull'estrazione del fenolo acido secondo Chomchinsky, in cui solo l'RNA rimane nella fase acquosa e il DNA in combinazione con le proteine passa nella fase organica. Il tiocianato di guanidina è usato come agente che isola e denatura le nucleasi cellulari.
permette di ottenere RNA altamente purificato, privo di impurità del DNA;
fornisce l'estrazione completa dell'RNA da sangue intero, frammenti di tessuto e colture cellulari;
ti permette di ottenere RNA intatto;
| Numero di catalogo | titolo | numero di reazioni |
| EX-509 | Kit di reagenti “DNA-Extra-1” per l'isolamento del DNA genomico da sangue intero | 100 |
| EX-511 | Kit di reagenti “DNA-Extran-2” per l'estrazione del DNA da tessuti animali e umani | 100 |
| EX-512 | Kit reagenti “DNA-Extran-3” per l'estrazione del DNA da colture batteriche | 100 |
| EX-513 | Kit reagenti “DNA-Extra-4” per l'estrazione del DNA da tessuti vegetali | 100 |
| EX-514 | Kit reagenti “K-Sorb” per isolamento su colonne di DNA totale (da sangue, saliva, urine, colture cellulari, raschiati di cellule epiteliali) | 100 |
| EX-515 | Kit di reagenti "RNA-Extra" per l'isolamento di RNA da sangue, tessuti, colture cellulari | 50 |
| OM-505 | Kit reagenti “M-Sorb-Tub” per estrazione DNA da campioni clinici e colture cellulari (su particelle magnetiche) | 50 o 100 |
| GM-502-50 | “SORB-GMO-A” (guanidina + sorbente) Set di reagenti per l'estrazione del DNA da materie prime vegetali e prodotti alimentari | 50 |
| GM-503-50 | “SORB-GMO-B” (CTAB + sorbent) Set di reagenti per l'estrazione del DNA da materie prime vegetali e prodotti alimentari | 50 |
| OM-506 | Kit di reagenti “M-Sorb-Leg1000” per l'isolamento del DNA della legionella da campioni di acqua fino a 1000 ml (su particelle magnetiche, i filtri sono forniti separatamente) | 50 o 100 |
| OM-507 | Kit reagenti “M-Sorb-Leg1” per l'isolamento del DNA della legionella da campioni di acqua fino a 1 ml (su particelle magnetiche) | 50 o 100 |
| OOM-502 | Kit di reagenti “M-sorb-OOM” per l'estrazione del DNA da oggetti ambientali (su particelle magnetiche) | 50 o 100 |
| Nome | Volume | Produzione | Metodo | Cat.Numero |
|---|---|---|---|---|
| “GMO-MagnoSorb” (guanidina + sorbente magnetico) Set di reagenti per l'estrazione del DNA da materie prime vegetali e prodotti alimentari | 50 secrezioni | Synthol | PCR in tempo reale | GM-505-50 |
| “SORB-GMO-A” (guanidina + sorbente) Set di reagenti per l'estrazione del DNA da materie prime vegetali e prodotti alimentari | 50 | Synthol | PCR in tempo reale | GM-502-50-50 |
| “SORB-GMO-B” (CTAB + sorbent) Set di reagenti per l'estrazione del DNA da materie prime vegetali e prodotti alimentari | 50 | Synthol | PCR in tempo reale | GM-503-50-50 |
| Set di reagenti “Amplitub-RV” kit n. 1 (“M-Sorb-Tub“) per l'isolamento del DNA di micobatteri da campioni clinici e colture cellulari (su particelle magnetiche) | 50 | Synthol | PCR in tempo reale | OM-505 |
| Kit di reagenti “DNA-Extra-1” per l'isolamento del DNA genomico da sangue intero | 100 | Synthol | PCR in tempo reale | EX-509-100 |
| Kit di reagenti “DNA-Extran-2” per l'estrazione del DNA da tessuti animali e umani | 100 | Synthol | PCR in tempo reale | EX-511 |
| Kit reagenti “DNA-Extran-3” per l'estrazione del DNA da colture batteriche | 100 | Synthol | PCR in tempo reale | EX-512-100 |
| Kit reagenti “DNA-Extran-3” per l'estrazione del DNA da tessuti vegetali | 100 | Synthol | PCR in tempo reale | EX-513-100 |
| Kit reagenti “K-Sorb” per isolamento su colonne di DNA totale (da sangue, saliva, urine, colture cellulari, raschiati di cellule epiteliali) | 100 | Synthol | PCR in tempo reale | EX-514-100 |
| 48 reazioni | Synthol | PCR in tempo reale | GM-443-48 | |
| Kit reagenti screening soia / 35S+FMV / NOS | 50 reazioni | Synthol | PCR in tempo reale | GM-416-50 |
Soluzione lisante 30 cm 3 ,
Soluzione di lavaggio 1 30 cm 3 ,
Concentrato per soluzione detergente 2 20 cm 3 ,
Sospensione assorbente 2 cm 3,
Tampone di eluizione del DNA 4 cm 3 .
Preparare la soluzione di lavaggio 2, per fare ciò, mescolare 20 cm 3 del concentrato dal kit, 80 cm 3 di acqua distillata e 100 cm 3 di etanolo al 96% in una bottiglia separata. Conservare la soluzione a temperatura ambiente in un flaconcino ben avvitato.
Controlla lo stato del sorbente: quando si deposita, dovrebbe occupare circa la metà del volume della sospensione.
In una provetta di polipropilene da 1,5 cm 3 ben chiusa (preferibilmente con tappo a vite), aggiungere 100 µl di un campione di test precedentemente preparato, negativo o positivo, aggiungere 300 µl di soluzione di lisi (a ciascun campione con una punta separata) e mescolare accuratamente pipettaggio 3-10 volte.
Aggiungere 15 - 20 µl del sorbente risospeso, mescolare bene su un vortex, mettere in un rack per 5-7 minuti per la completa sedimentazione del sorbente.
Sedimentare il sorbente in microcentrifuga per 30 secondi a 3-8 mila rpm. Prelevare il surnatante da ciascuna provetta con una punta separata (è conveniente utilizzare un'aspirazione sottovuoto).
Aggiungere 300 μl di soluzione di lavaggio 1, agitare su vortex fino a completa risospensione del sorbente (se il sorbente si rompe male romperlo con una pipetta), precipitare in centrifuga a 4-8 mila rpm per 30 sec. Prelevare il supernatante da ciascuna provetta con una punta separata.
Aggiungere 800 μl di soluzione di lavaggio 2, agitare su vortex fino a completa risospensione del sorbente, precipitare in microcentrifuga a 6-10 mila rpm per 30 sec, prelevare il surnatante.
Ripetere il passaggio 6, selezionare accuratamente il supernatante, asciugare il precipitato assorbente in un termostato a 65°C per 5 min.
Risospendere il sorbente in 30–40 µl di tampone di eluizione, porre in un termostato a 65°C per 5 min, agitando periodicamente su vortex.
Sedimento su una microcentrifuga ad una velocità massima di 1 min.
Il campione è pronto per la PCR, il surnatante contiene DNA purificato.
Come controllo negativo nella fase di estrazione del DNA, è necessario utilizzare acqua salina o deionizzata.
L'efficienza dell'estrazione del DNA utilizzando il kit DNA-sorb-PCR è del 30-60%.
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materiale clinico |
Plasma, siero |
Raschiamento, sperma, lavaggi faringei, urina |
Biopsia, sangue, feci |
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Numero di pipettamenti | |||
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Volume assorbente | |||
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Tasso di sedimentazione dell'assorbente |
8mila giri al minuto |
6mila giri al minuto |
3-4 mila giri al minuto |
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Volume dell'eluente | |||
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Efficienza di estrazione del DNA |
5x tampone di reazione 1000 µl (soluzione viscosa blu trasparente)
Acqua deionizzata.2000 µl
Miscela di nucleotidi.500 µl
Taq polimerasi.100 µl
Miscela di primer.500 µl
Cera per PCR.2000 µl
Controllo positivo 100 µl
Controllo negativo 100 µl
Olio minerale 4000 µl
Il kit viene conservato a meno 20°C per un anno.
