Intizarov Mihail Mihajlovics, az Orosz Mezőgazdasági Tudományos Akadémia akadémikusa, prof..
ELŐSZÓ
Amikor számos bakteriális és vírusos etiológiájú fertőző betegség leküzdésének módjait mérlegelik, gyakran a patogén mikroorganizmusokra összpontosítanak - ezek a betegségek kórokozói, és ritkábban fordítanak figyelmet az állati test normál mikroflórájára. De bizonyos esetekben a közönséges mikroflóra szerzi meg nagyon fontos a betegség előfordulásában vagy kialakulásában, hozzájárulva annak megnyilvánulásához vagy megakadályozva azt. Néha a szokásos mikroflóra olyan kórokozó vagy opportunista fertőző ágensek forrásává válik, amelyek endogén fertőzést, másodlagos fertőzések megnyilvánulását stb. néhány kórokozó mikroorganizmus által okozott fertőző folyamat. Ezért ismerni az összetételt, tulajdonságait, mennyiségi jellemzőit, biológiai jelentőségét különböző csoportokés a szervezet normál mikroflórájának (emlősök, beleértve a háziállatokat, a haszonállatokat és az embereket) képviselőinek orvosoknak, biológusoknak, állattenyésztőknek, egyetemi tanároknak és tudósoknak kell lenniük.
Bevezetés
Az emlősök, köztük a mezőgazdasági, háziállatok és emberek szervezetének mikroflóráját a mikrobiológia mint tudomány fejlődésével párhuzamosan kezdték vizsgálni, L. Pasteur, R. Koch, I. I. Mechnikov nagy felfedezéseinek megjelenésével. diákok és alkalmazottak. Tehát 1885-ben T. Escherich a gyermekek ürülékéből izolálta a bél mikroflóra kötelező képviselőjét - az Escherichia colit, amely szinte minden emlősben, madarakban, halakban, hüllőkben, kétéltűekben, rovarokban stb. megjelent a bélpálcikák fontossága a létfontosságú tevékenység, a makroorganizmus egészsége szempontjából. S. O. Jensen (1893) megállapította, hogy különböző típusokés az Escherichia coli törzsek egyaránt lehetnek kórokozók az állatok számára (szeptikus betegséget és hasmenést okoznak a borjakban), és nem patogének, azaz teljesen ártalmatlanok, sőt hasznosak is lehetnek az állatok és az emberek bélrendszerében. 1900-ban G. Tissier felfedezte az újszülöttek székletében a bifizhbakter "és - meszet: és a szervezet normális bélmikroflórájának kötelező képviselőit élete minden időszakában. A tejsavrudakat (L. acidophilus) Moreau izolálta 1900-ban.
Definíciók, terminológia
A normál mikroflóra az egészséges emberekben és állatokban található mikroorganizmusok nyílt biocenózisa (V. G. Petrovskaya, O. P. Marko, 1976). Ennek a biocenózisnak egy teljesen egészséges szervezetre kell jellemzőnek lennie; fiziológiás, azaz segíti a makroorganizmus egészséges állapotának megőrzését, normál élettani funkcióinak megfelelő beadását. Az állat testének teljes mikroflóráját automikroflórának is nevezhetjük (az "auto" szó jelentése szerint), vagyis az adott szervezet bármilyen összetételű mikroflórájának (O.V. Chakhava, 1982), normális és kóros állapotokban.
Normál mikroflóra kapcsolódó csak egészséges állapot szervezetet, számos szerző két részre osztja:
1) kötelező, állandó rész, filogenezisben és ontogenezisben képződik ban ben az evolúció folyamata, amelyet bennszülöttnek (azaz lokálisnak), őshonosnak (bennszülöttnek), rezidensnek stb. is neveznek;
2) opcionális vagy átmeneti.
A makroorganizmusba véletlenül behatoló patogén mikroorganizmusok időszakosan bekerülhetnek az automikroflóra összetételébe.
Fajösszetétel és mennyiségi jellemzőkaz állati test legfontosabb területeinek mikroflórája
Általában több tucat és több száz különféle mikroorganizmusfaj kapcsolódik az állati szervezethez. Ők , ahogy V. G. Petrovskaya és O. P. Marko (1976) írja, ezek kötelezőek a szervezet egészére nézve. Sokféle mikroorganizmus található a test számos területén, és csak mennyiségileg változnak. Ugyanabban a mikroflórában az emlős típusától függően mennyiségi eltérések lehetségesek. A legtöbb állatot általános átlagok jellemzik testük számos területén. Például a gyomor-bél traktus disztális, alsó részeit a következő mikrobacsoportok jellemzik, amelyeket a béltartalomban vagy a székletben mutatunk ki (1. táblázat).
A táblázat tetején 1. csak kötelező anaerob mikroorganizmusokat adnak - a bélflóra képviselőit. Mára megállapították, hogy a szigorúan anaerob fajok a bélben 95-99%-ot, míg a maradék 1-5%-ot teljesen aerob és fakultatív anaerob fajok teszik ki.
Annak ellenére, hogy több tíz és száz (akár 400) ismert fajok mikroorganizmusok, létezhetnek teljesen ismeretlen mikroorganizmusok is, így egyes rágcsálók vakbélében és vastagbelében az elmúlt évtizedekben olyan úgynevezett fonalas szegmentált baktériumok jelenlétét állapították meg, amelyek nagyon szorosan kapcsolódnak a felszínhez (glikokalix, ecsetszegély ) a bélnyálkahártya hámsejtjeinek. Ezeknek a hosszú, fonalas baktériumoknak a vékony vége a hámsejtek kefeszegélyének mikrobolyhai közé süllyed, és úgy tűnik, hogy ott rögzül oly módon, hogy megnyomja a sejtmembránokat. Ezek a baktériumok olyan sokak lehetnek, hogy a fűhöz hasonlóan beborítják a nyálkahártya felületét. Ezek is szigorú anaerobok (a rágcsálók bélmikroflórájának kötelező képviselői), a szervezet számára hasznos fajok, amelyek nagyrészt normalizálják a bélműködést. Ezeket a baktériumokat azonban csak bakterioszkópos módszerekkel (a bélfal szakaszainak pásztázó elektronmikroszkópiájával) mutatták ki. A fonalas baktériumok nem szaporodnak az általunk ismert táptalajokon, csak sűrű agar táptalajon képesek életben maradni egy hétnél tovább) J . P. Koopman et. al., 1984).
A mikroorganizmusok eloszlása a gyomor-bél traktusban
A gyomornedv magas savassága miatt a gyomor kis számú mikroorganizmust tartalmaz; Ez elsősorban egy saválló mikroflóra - laktobacillusok, streptococcusok, élesztő, szardínia stb. A mikrobák száma 10 3 / g tartalom.
A nyombél és a jejunum mikroflórája
A bélrendszerben mikroorganizmusok találhatók. Ha nem lennének egyik osztályon sem, akkor nem fordulna elő mikrobiális etiológiájú hashártyagyulladás, amikor a bél megsérül. Csak a vékonybél proximális részein található kevesebb fajta mikroflóra, mint a vastagbélben. Ezek a laktobacillusok, enterococcusok, szardínia, gombák, az alsó szakaszokon megnő a bifidobaktériumok, az Escherichia coli száma. Ez a mikroflóra mennyiségileg eltérő lehet a különböző egyéneknél. Minimális fokú szennyeződés lehetséges (10 1 - 10 3 / g tartalom), jelentős - 10 3 - 10 4 / g A vastagbél mikroflórájának mennyiségét és összetételét a táblázat tartalmazza. 1.
A bőr mikroflóra
A bőr mikroflórájának fő képviselői a diftéria (korinebaktériumok, propionbaktériumok), gombák, élesztőgomba, spóra aerob bacilusok (bacillusok), staphylococcusok (elsősorban a S. epidermidis dominál, de nem egészséges bőrön nagy számban S is jelen van. aureus).
A légutak mikroflórája
A légutak nyálkahártyáján a legtöbb mikroorganizmus az orrgaratban található, a gége mögött sokkal kevesebb, a nagy hörgőkben még kevesebb, és a tüdő mélyén. egészséges test nincs mikroflóra.
Az orrjáratokban difteroidok, elsősorban gyökérbaktériumok, állandó staphylococcusok (rezidens S. epidermidis), Neisseria, hemofil baktériumok, streptococcusok (alfa-hemolitikus); a nasopharynxben - corynebacteriumok, streptococcusok (S. mitts, S. salivarius stb.), staphylococcusok, neisseoii, vayloNella, hemofil baktériumok, enterobaktériumok, bakteroidok, gombák, enterococcusok, lactobacillusok, Pseudomonas a. subtilli típusúak. tranziens stb.
A légutak mélyebb részeinek mikroflóráját kevésbé vizsgálták (A - Halperin - Scott et al., 1982). Embereknél ez az anyagbeszerzés nehézségeiből adódik. Állatoknál az anyag jobban hozzáférhető a kutatáshoz (az elejtett állatok felhasználhatók). Egészséges sertésekben vizsgáltuk a középső légúti mikroflórát, beleértve azok miniatűr (laboratóriumi) fajtáját is; az eredményeket az 1. táblázat tartalmazza. 2.
Az első négy képviselőt folyamatosan (100%) észlelték, kevesebben (1/2-1/3 eset) telepedtek meg: laktobacillusok (10 2 -10 3), E. coli (10 2 -III 3), penészgombák ( 10 2 -10 4), élesztő. Más szerzők a Proteus, a Pseudomonas aeruginosa, a Clostridia, az aerob bacillusok képviselőinek átmeneti hordozását figyelték meg. Ugyanebben a tervben egyszer azonosítottuk a Bacteroides melaninoge - nicust.
Az emlősök születési csatornájának mikroflórája
Legutóbbi, főként külföldi szerzők által készített tanulmányok (Boyd, 1987; A. B. Onderdonk és mtsai, 1986; J. M. Miller és mtsai, 1986; A. N. Masfari et al., 1986; H. Knothe u A. 1987) kimutatták, hogy a kolonizáló mikroflóra (azaz lakik) a szülőcsatorna nyálkahártyája igen változatos és fajgazdag. A normál mikroflóra összetevői széles körben képviseltetik magukat, sok szigorúan anaerob mikroorganizmust tartalmaz (3. táblázat).
Ha a szülőcsatorna mikrobafajait összehasonlítjuk a test más területeinek mikroflórájával, azt tapasztaljuk, hogy az anya szülőcsatornájának mikroflórája ebből a szempontból hasonló a szervezet mikrobalakóinak fő csoportjaihoz. a leendő fiatal szervezetből, vagyis normál mikroflórájának kötelező képviselőiből az állat megkapja, amikor áthalad az anya születési csatornáján. A fiatal állat testének további megtelepedése az anyától kapott, evolúciósan alátámasztott mikroflóra fiasításából történik. Meg kell jegyezni, hogy egy egészséges nőstényben a méhben lévő magzat a szülés kezdetéig steril.
Az állati szervezet helyesen kialakult (az evolúció során kiválasztott) normál mikroflórája azonban teljesen nem azonnal, hanem néhány napon belül benépesíti a testét, és bizonyos arányokban képes elszaporodni. V. Brown a következő képződési sorrendet adja meg az újszülött életének első 3 napjában: a baktériumokat az újszülött testéből közvetlenül a születés után vett legelső mintákban találják meg. Tehát az orrnyálkahártyán eleinte a koaguláz-negatív staphylococcusok (S. epidermidis) voltak túlsúlyban; a garat nyálkahártyáján - ugyanazok a staphylococcusok és streptococcusok, valamint kis mennyiségű epterobaktérium. A végbélben az 1. napon már találtak E. colit, enterococcusokat, ugyanazokat a staphylococcusokat, a születést követő harmadik napon pedig mikrobiális biocenózis alakult ki, amely többnyire normális a vastagbél normál mikroflórájára nézve (W. Braun, F. Spenckcr u. a., 1987).
Különbségek a test mikroflórájában különböző típusokállatokat
A mikroflóra fenti kötelező képviselői a legtöbb házi, mezőgazdasági emlősre és az emberi szervezetre jellemzőek. Az állatfajtától függően inkább a mikrobacsoportok száma változhat, de a fajösszetételük nem. Kutyákban az Escherichia coli és a lactobacillusok száma a vastagbélben megegyezik a táblázatban láthatóval. 1. A bifidobaktériumok azonban egy nagyságrenddel kisebbek voltak (10 8/1 g), egy nagyságrenddel magasabbak voltak a streptococcusok (S. lactis, S. mitis, enterococcusok) és a clostridiumok. Patkányokban és egerekben (laboratóriumban) a tejsavbacilusok (laktobacillusok) száma ugyanannyival, több streptococcus és clostridium emelkedett. Ezeknek az állatoknak van bél mikroflóra kevés Escherichia coli volt, és a bifidobaktériumok száma is csökkent. Az Escherichia coli száma is csökken a tengerimalacokban (V. I. Orlovsky szerint). A tengerimalacok ürülékében kutatásunk szerint 10 3 -10 4/1 g Escherichia coli, 1 g-ban 2 laktobacillus volt.
Egészséges sertéseknél (adataink szerint) a légcső és a nagy hörgők mikroflórája sem mennyiségileg, sem minőségileg nem tért el szignifikánsan az átlagos mutatóktól, és nagyon hasonló az emberi mikroflórához. Bélmikroflórájukat is bizonyos hasonlóság jellemezte.
A kérődzők bendőjének mikroflóráját sajátos jellemzők jellemzik. Ez nagyrészt a baktériumok – rostbontó – jelenlétének köszönhető. Azonban a cellulolitikus baktériumok (és általában a fibrolitikus baktériumok), amelyek a kérődzők emésztőrendszerére jellemzőek, semmiképpen sem szimbiontái ezeknek az állatoknak. Tehát a sertések és sok növényevő vakbélben fontos szerepet játszanak a cellulóz- és hemicellulózrostok olyan, a kérődzőknél gyakori felhasadói, mint a Bacteroides succinogenes, a Ruminococcus flavefaciens, a Bacteroides ruminicola és mások (V. H. Varel, 1987).
A test normál mikroflórája és a kórokozó mikroorganizmusok
A fent felsorolt kötelező makroorganizmusok főként a pepatogén mikroflóra képviselői. Az e csoportokba tartozó fajok közül sokat a makroorganizmus szimbiontáinak is neveznek (laktobacillusok, bifeldobaktériumok), és hasznosak számára. Számos nem patogén clostridia, bakteroid, eubaktérium, enterococcus, nem patogén Escherichia coli stb. fajában azonosítottak bizonyos jótékony funkciókat. Ezeket és a test mikroflórájának más képviselőit „normális” mikroflórának nevezik. A kevésbé ártalmatlan, opportunista és magas patogenitású mikroorganizmusok azonban időről időre szerepelnek a makroorganizmusok élettani mikrobiocenózisában. A jövőben ezek a kórokozók:
a) többé-kevésbé hosszú ideig léteznek a szervezetben
az automikroflóra teljes komplexumának részeként; ilyenkor kórokozó mikrobák hordozója képződik, de mennyiségileg ennek ellenére a normál mikroflóra érvényesül;
b) a normál mikroflóra hasznos szimbiotikus képviselői kiszorítják (gyorsan vagy valamivel később) a makroorganizmusból, és eltávolítják őket;
c) szaporodnak a normál mikroflóra kiszorításával oly módon, hogy a makroorganizmus bizonyos fokú megtelepedésével a megfelelő betegséget okozhatják.
Az állatok és az emberek belében például a nem patogén klostrídiumok bizonyos típusai mellett a C. perfringens is kis számban él. Az egészséges állat teljes mikroflórájának részeként a C. perfringens mennyisége nem haladja meg a 10-15 milliót 1 g-onként, bizonyos körülmények között azonban, amelyek esetleg a normál mikroflóra megzavarásával járnak, a kórokozó C. perfringens elszaporodik az állaton. bélnyálkahártya nagy számban (10 7 -10 9 vagy több), anaerob fertőzést okozva. Ilyenkor még a normál mikroflórát is kiszorítja, és szinte tisztatenyészetben kimutatható a csípőbél nyálkahártyájának sárosodott katájában. Hasonló módon a bél coli fertőzés kialakulása a fiatal állatok vékonybélében történik, csak az Escherichia coli patogén típusai szaporodnak ott ugyanolyan gyorsan; kolerában a bélnyálkahártya felszínét a Vibrio cholerae stb.
A normál mikroflóra biológiai szerepe (funkcionális értéke).
A patogén és feltételesen patogén mikroorganizmusok az állat élete során időszakosan érintkeznek és behatolnak a testébe, és bekerülnek a mikroflóra általános komplexumába. Ha ezek a mikroorganizmusok nem tudnak azonnal betegséget okozni, akkor egy ideig együtt élnek a szervezet más mikroflórájával, de gyakrabban átmenetiek. Tehát a szájüregben a patogén és opportunista fakultatív tranziens mikroorganizmusok közül a P, aeruginosa, C. perfringens, C. albicans képviselői (az Esoherichia, Klebsiella, Proteus nemzetségek) lehetnek jellemzőek, a bélre pedig szintén egyenletesek. patogénebb enterobaktériumok, valamint B fragilis, C. tetani, C. sporogenes, Fusobacterium necrophorum, a Campylobacter nemzetség néhány képviselője, bélspirocheták (beleértve a patogén, feltételesen patogéneket) és még sokan mások. A bőrt és a nyálkahártyákat a S. aureus; a légutak számára - ez is pneumococcus stb.
A szervezet hasznos, szimbiotikus normál mikroflórájának szerepe és jelentősége azonban az, hogy ezeket a kórokozó fakultatív-tranziens mikroorganizmusokat nem könnyen engedi be környezetébe, az általa már elfoglalt térökológiai résekbe. A normál mikroflóra őshonos részének fenti képviselői az újszülöttnek az anya szülőcsatornáján való áthaladása során is elsőként foglalták el helyüket az állat testén, vagyis kolonizálták annak bőrét, gyomor-bélrendszerét. valamint a légutakat, a nemi szerveket és a test más területeit.
Az állati test patogén mikroflórájának kolonizációját (megtelepedését) megakadályozó mechanizmusok
Megállapítást nyert, hogy a normál mikroflóra őshonos, obligát részének legnagyobb populációi jellegzetes helyeket foglalnak el a bélben, egyfajta területet a bél mikrokörnyezetében (D. Savage, 1970). Tanulmányoztuk a bifidobaktériumok, bakteroidok ezt az ökológiai jellemzőjét, és azt találtuk, hogy nem egyenletesen oszlanak el a bélcsatornában a bélcső teljes üregében, hanem nyálkahártya (mucin) csíkokban és rétegekben terjednek el a nyálkahártya felszínének összes görbületét követve. a vékonybél membránja. Részben szomszédosak a nyálkahártya hámsejtjeinek felületével. Mivel a bifidobaktériumok, a bakteroidok és mások először a bél mikrokörnyezetének ezen alrégióit kolonizálják, sok, később a bélbe jutó kórokozó számára akadályt képeznek a nyálkahártyán való közeledésben és rögzítésben (tapadásban). És ez az egyik vezető tényező, hiszen bebizonyosodott, hogy patogenitásuk (betegséget okozó képességük) felismeréséhez minden kórokozó mikroorganizmusnak, beleértve a bélfertőzést okozókat is, meg kell tapadnia a bélhámsejtek felületén, majd szaporodjon rajta, vagy mélyebbre hatolva kolonizálja ugyanazokat vagy közeli alrégiókat, amelyek területén már hatalmas populációk alakultak ki, például bifidobaktériumok. Kiderült, hogy ebben az esetben egy egészséges szervezet bifidoflórája megvédi a bélnyálkahártyát egyes kórokozóktól, korlátozva azok hozzáférését a membrán hámsejtek felszínéhez és a hámsejtek receptoraihoz, amelyeken a kórokozó mikrobákat kell rögzíteni.
A normál mikroflóra autochton részének számos képviselője számára számos más antagonizmus mechanizmusa ismert a patogén és feltételesen patogén mikroflórával kapcsolatban:
Rövid szénatomláncú illékony zsírsavak előállítása (ezeket a normál mikroflóra szigorúan anaerob része képezi);
Szabad epe metabolitok képződése (laktobacillusok, bifidobaktériumok, bakteroidok, enterococcusok és még sokan mások képezhetik ezeket az epesók dekonjugálásával);
Lizozim termelése (jellemző a laktobacillusokra, bifidobaktériumokra);
A környezet elsavasodása, szerves savak előállítása során;
colicinek és bakteriocinek (streptococcusok, staphylococcusok, Escherichia coli, Neisseria, propionos baktériumok stb.) előállítása;
Különféle antibiotikum-szerű anyagok szintézise számos tejsav mikroorganizmus által - Streptococcus lactis, L. acidophilus, L. fermentum, L. brevis, L. helveticus, L. pjantarum stb.;
A kórokozó fajokhoz kapcsolódó nem patogén mikroorganizmusok versengése patogén fajokkal a makroorganizmus sejtjein lévő ugyanazon receptorokért, amelyekhez kórokozó rokonaikat is rögzíteni kell;
A szimbiotikus mikrobák felszívódása a normál mikroflóra összetételéből a kórokozó mikrobák életéhez szükséges egyes fontos összetevők és tápanyag-elemek (például vas) által.
Ezen mechanizmusok és tényezők közül sok, amelyek az állat testének mikroflórájának képviselőiben léteznek, kombinálva és kölcsönhatásba lépve egyfajta gáthatást hoznak létre - akadályozzák az opportunista és patogén mikroorganizmusok szaporodását az állat testének bizonyos területein. A makroorganizmus rezisztenciáját a kórokozók által okozott kolonizációval szemben, amelyet szokásos mikroflórája hoz létre, kolonizációs rezisztenciának nevezzük. Ezt a patogén mikroflóra kolonizációval szembeni ellenállást elsősorban a normál mikroflóra részét képező, szigorúan anaerob mikroorganizmusok hasznos fajainak komplexe hozza létre: a nemzetségek különböző képviselői - Bifidobacterium, Bacteroides, Eubacterium, Fusobacterium, Clostridium (nem patogén), mint valamint fakultatív anaerobok, például a Lactobacil-lus nemzetség, a nem patogén E. coli, S. faecalis, S. faecium és mások. A test normál mikroflórájának szigorúan anaerob képviselőinek ez a része dominál a populációk számát tekintve a teljes bél mikroflórában 95-99% között. Ezen okok miatt a test normál mikroflóráját gyakran az egészséges állat és ember testének nem specifikus ellenállásának további tényezőjének tekintik.
Nagyon fontos azoknak a feltételeknek a megteremtése és megfigyelése, amelyek között a normál mikroflórával rendelkező újszülött települése közvetlenül vagy közvetve kialakul. Állatorvosoknak, adminisztratív és gazdasági dolgozóknak, állattenyésztőknek kell megfelelően felkészíteniük az anyákat a szülésre, le kell vezetniük a szülést, biztosítaniuk kell az újszülöttek kolosztrummal és tejjel történő táplálását. Gondosan kell kezelni a születési csatorna normál mikroflórájának állapotát.
Az állatorvosoknak szem előtt kell tartaniuk, hogy az egészséges nőstények születési csatornájának normális mikroflórája a hasznos mikroorganizmusok fiziológiai alapú tenyésztése, amely meghatározza a leendő állat testének teljes mikroflórájának megfelelő fejlődését. Ha a szülés komplikációmentes, akkor a mikroflórát nem szabad megzavarni indokolatlan terápiás, megelőző és egyéb hatásokkal; kellően meggyőző bizonyíték nélkül ne vigyen be antiszeptikumokat a szülőcsatornába, használjon tudatosan antibiotikumot.
koncepcióról rőldiszbakteriózis
Vannak esetek, amikor a normál mikroflórában a fajok evolúciósan kialakult aránya megsérül, vagy a szervezet automikroflórájában a legfontosabb mikroorganizmuscsoportok közötti mennyiségi arányok megváltoznak, vagy maguknak a mikrobák képviselőinek minősége megváltozik. Ebben az esetben dysbacteriosis lép fel. Ez pedig utat nyit az automikroflóra kórokozó és opportunista képviselői előtt, amelyek behatolhatnak vagy elszaporodhatnak a szervezetben és betegségeket, működési zavarokat stb. bizonyos határok között visszafogja az állati szervezet automikroflóráját az opportunista részt.
A szervezet automikroflórájának morfofunkcionális szerepe és metabolikus funkciója
Az automikroflóra megszületése után úgy hat a makroorganizmusra, hogy hatása alatt számos, a külső környezettel érintkező szerv szerkezete és működése megérik és kialakul. Ily módon a gyomor-bélrendszer, a légzőszervek, az urogenitális traktusok és más szervek morfofunkcionális megjelenést nyernek egy felnőtt állatban. A biológiai pókok egy új területe, a gnotobiológia, amely L. Pasteur kora óta sikeresen fejlődik, lehetővé tette annak világos megértését, hogy egy felnőtt, normálisan fejlett állati szervezet számos immunbiológiai jellemzője az automikroflóra hatására alakul ki. a testét. A császármetszéssel nyert, majd hosszú ideig speciális steril gnotobibológiai izolátorokban, anélkül, hogy életképes mikroflórájuk hozzáférhetett volna a mikrobamentes állatok (gnotobioták) a nyálkahártya embrionális állapotának sajátosságai, amelyek kommunikálnak a nyálkahártya külső környezetével. szervek. Immunbiológiai állapotuk is megőrzi embrionális jellemzőit. Figyelje meg a limfoid szövet hipopláziáját ezeknek a szerveknek az első helyén. A mikrobamentes állatokban kevesebb immunkompetens sejtelem és immunglobulin van. Jellemző azonban, hogy egy ilyen gnotobiotikus állat szervezete potenciálisan képes marad immunbiológiai képességek kifejlesztésére, és csak a közönséges állatoknál (születéstől kezdve) az automikroflórából származó antigén ingerek hiánya miatt nem ment keresztül természetes úton. általánosságban az egész immunrendszert érintő fejlődés, valamint olyan szervek nyálkahártyájának helyi limfoid felhalmozódása, mint a belek, légutak, szem, orr, fül stb. Így a folyamat során egyéni fejlődés Az állati szervezet automikroflórájából erednek azok a hatások, beleértve az antigén ingereket is, amelyek meghatározzák egy közönséges felnőtt állat normális immunmorfofunkciós állapotát.
Az állati szervezet mikroflórája, különösen a gyomor-bél traktus mikroflórája fontos anyagcsere-funkciókat lát el a szervezet számára: befolyásolja a vékonybélben történő felszívódást, enzimjei részt vesznek az epesavak lebontásában és anyagcseréjében a bélben, és képződnek. szokatlan zsírsavak az emésztőrendszerben. A mikroflóra hatására a bélben a makroorganizmus egyes emésztőenzimeinek katabolizmusa megy végbe; enterokináz, alkalikus foszfatáz inaktiválódik, lebomlik, az emésztőrendszer egyes, funkcióját betöltött immunglobulinjai a vastagbélben lebomlanak, stb. A gyomor-bél traktus mikroflórája számos, a makroorganizmus számára szükséges vitamin szintézisében vesz részt. Képviselői (például számos típusú bakteroid, anaerob streptococcus stb.) enzimeikkel képesek lebontani az állati szervezet által önállóan megemészthetetlen rostokat, pektin anyagokat.
Néhány módszer az állati test mikroflórájának megfigyelésére
A mikroflóra állapotának nyomon követése adott állatokban vagy csoportjaikban lehetővé teszi a normál mikroflóra egy fontos őshonos részének nemkívánatos változásainak időben történő korrigálását, a hasznos baktériumok képviselőinek, például bifidobaktériumok vagy laktobacillusok stb. mesterséges bejuttatásából adódó jogsértések kijavítását, és megakadályozzák a diszbakteriózis kialakulását nagyon súlyos formákban. Az ilyen védekezés akkor kivitelezhető, ha a megfelelő időben mikrobiológiai vizsgálatokat végeznek a fajösszetételre és a mennyiségi arányokra, elsősorban az állat testének egyes területeinek autochton szigorúan anaerob mikroflórájában. Bakteriológiai vizsgálathoz a nyálkahártyából, a szervek tartalmából, vagy akár magának a szervnek a szövetéből vesznek nyálkát.
Anyagfelvétel. A vastagbél vizsgálatához speciálisan steril csövek - katéterek - vagy egyéb módon steril edényekben gyűjtött ürülék használható. Néha a gyomor-bél traktus vagy más szervek különböző részeinek tartalmát kell bevenni. Ez főleg az állatok levágása után lehetséges. Ily módon anyag nyerhető a jejunumból, nyombélből, gyomorból stb. A bélszakaszokat a tartalommal együtt véve lehetővé válik mind a tápcsatorna, mind a bélfal mikroflórájának meghatározása kaparék, homogenizátumok készítésével. a nyálkahártya vagy a bélfal. Az állatok vágás utáni anyagának felvétele lehetővé teszi az általános felső és középső légutak (légcső, hörgők stb.) normál mikroflórájának teljesebb és átfogóbb meghatározását is.
Kvantitatív kutatás. A különböző mikroorganizmusok mennyiségének meghatározásához az állatból így vagy úgy vett anyagból 9-10 tízszeres (10 1-től 10 10-ig terjedő) hígítást készítünk steril sóoldatban, vagy néhányat (a típusnak megfelelően). a mikroba) steril folyékony táptalaj. Ezután minden hígításból a kisebbtől a töményebbig kezdődően a megfelelő táptalajra vetik.
Mivel a vizsgált minták vegyes mikroflórájú biológiai szubsztrátok, a táptalajokat úgy kell megválasztani, hogy mindegyik kielégítse a kívánt mikroba nemzetség vagy faj növekedési igényeit, és egyidejűleg gátolja a többi kísérő mikroflóra növekedését. Ezért kívánatos, hogy a média szelektív legyen. A normál mikroflórában betöltött biológiai szerepe és jelentősége szerint az őshonos, szigorúan anaerob része fontosabb. Kimutatásának technikái megfelelő tápközeg és speciális anaerob termesztési módszerek használatán alapulnak; a fent felsorolt szigorúan anaerob mikroorganizmusok többsége tenyészthető új, dúsított és univerzális, 105. számú táptalajon A. K. Baltrashevich et al. (1978). Ez a táptalaj összetett összetételű, ezért sokféle mikroflóra növekedési igényeit képes kielégíteni. Ennek a környezetnek a receptje megtalálható a "A gnotobiológia elméleti és gyakorlati alapjai" című kézikönyvben (M.: Kolos, 1983). Különféle lehetőségek Ez a tápközeg (steril vér hozzáadása nélkül, véres, sűrű, félfolyékony stb.) lehetővé teszi számos kötelező anaerob faj termesztését, anaerob körülmények között oxigén nélküli gázkeverékben és kívül anaerobban, félfolyékony változat alkalmazásával 105. számú táptalaj kémcsövekben.
Ezen a táptalajon bifidobaktériumok is szaporodnak, ha 1% laktózt adunk hozzá. A nem mindig elérhető komponensek rendkívül nagy száma és a 105. számú közeg összetett összetétele miatt azonban nehézségek adódhatnak a gyártás során. Ezért célszerűbb a Blaurock-féle táptalaj alkalmazása, amely nem kevésbé hatékony a bifidobaktériumokkal végzett munka során, de egyszerűbb és könnyebben előállítható (Goncharova G.I., 1968). Összetétele és elkészítése: májleves - 1000 ml, agar-agar - 0,75 g, pepton - 10 g, laktóz - 10 g, cisztin - 0,1 g, konyhai só (x / h) - 5 g. főzet: 500 g friss marhamájat apróra vágva, öntsünk 1 liter desztillált vizet és forraljuk 1 órán át; védje meg és szűrje át pamut-gézszűrőn, töltse fel desztillált vízzel az eredeti térfogatra. Ehhez a főzethez olvasztott agar-agart, peptont és cisztint adunk; állítsa be a pH-t 8,1-8,2 értékre 20%-os nátrium-hidroxiddal, és forralja 15 percig; 30 percig állni hagyjuk és szűrő. A szűrletet desztillált vízzel 1 literre melegítjük, és laktózt adunk hozzá. Ezután 10-15 ml-es kémcsövekbe öntjük, és folyó gőzzel frakcionáltan sterilizáljuk (Blokhina I.N., Voronin E.S. et al., 1990).
Annak érdekében, hogy ezeknek a tápközegeknek szelektív tulajdonságokat adjunk, megfelelő szereket kell bevezetni, amelyek gátolják más mikroflóra növekedését. Bakteroidok kimutatására - ez a neomicin, kanamicin; spirálisan ívelt baktériumokhoz (például bélspirochetákhoz) - spektinomicin; a Veillonella nemzetség anaerob coccusaira - vancomycin. A bifidobaktériumok és más gram-pozitív anaerobok izolálására a mikroflóra vegyes populációiból nátrium-azidot adnak a táptalajhoz.
Az anyagban lévő laktobacillusok mennyiségi meghatározásához Rogosa sós agart célszerű használni. Szelektív tulajdonságokat kölcsönöz neki ecetsav hozzáadása, amely pH = 5,4-et eredményez ebben a közegben.
A laktobacillusok számára nem szelektív táptalaj lehet a tej krétával készült hidrolizátuma: egy liter pasztőrözött, fölözött tejhez (pH -7,4-7,6), amely nem tartalmaz antibiotikum-szennyeződéseket, adjunk hozzá 1 g pankreatinport és 5 ml kloroformot; rendszeresen rázza fel; 72 órára termosztátba tesszük 40 °C-on. Ezután leszűrjük, pH = 7,0-7,2 értékre állítjuk és 1 atm nyomáson sterilizáljuk. 10 perc. A kapott hidrolizátumot vízzel 1:2 arányban hígítjuk, hozzáadunk 45 g hővel sterilizált krétaport és 1,5-2% agar-agart, addig melegítjük, amíg az agar megolvad, majd autoklávban újra sterilizáljuk. Használat előtt a közeget ferde. Adott esetben bármilyen szelekciós szer adható a táptalajhoz.
Lehetőség van a staphylococcusok azonosítására és szintjének meghatározására egy meglehetősen egyszerű táptalajon - glükózsó hús-pepton agar (MPA 10% sóval és 1-2% glükózzal); enterobaktériumok - Endo táptalajon és más táptalajokon, amelyek előírásai megtalálhatók bármely mikrobiológiai kézikönyvben; élesztő és gombák – Sabouraud táptalajon. Az aktinomicétákat célszerű Krasilnikov-féle SR-1 táptalajon kimutatni, amely 0,5 db kétbázisú kálium-foszfátot tartalmaz. 0,5 g magnézium-szulfát, 0,5 g nátrium-klorid, 1,0 g kálium-nitrát, 0,01 g vas-szulfát, 2 g kalcium-karbonát, 20 g keményítő, 15-20 g agar-agar és legfeljebb 1 liter desztillált víz . Oldjuk fel az összes összetevőt, keverjük össze, melegítsük, amíg az agar elolvad, állítsuk be a pH-t = 7, szűrjük, öntsük kémcsövekbe, sterilizáljuk autoklávban 0,5 atm-en. 15 perc, vetés előtt nyírni.
Az enterococcusok kimutatására szelektív táptalaj (agar-M) kívánatos a következő összetételű egyszerűsített változatban: 1 liter olvadt steril MPA-hoz adjunk 4 g diszubsztituált foszfátot minimális mennyiségű steril desztillált vízben oldva, 400 mg szintén feloldott. nátrium-aeid; 2 g oldott glükóz (vagy 40% -os glükóz steril oldata - 5 ml). Mozgass mindent. Miután az elegy körülbelül 50 °C-ra lehűlt, adjunk hozzá 100 mg TTX-t (2,3,5-trifenil-tetrazolium-klorid) steril desztillált vízben oldva. Keverje össze, ne sterilizálja a táptalajt, azonnal öntse steril Petri-csészékbe vagy kémcsövekbe. Az entero coccusok ezen a táptalajon kicsi, szürkésfehér telepekként nőnek. De gyakrabban a TTX keveredése miatt az euterococcusok kolóniái sötét cseresznyeszínt kapnak (a teljes kolónia vagy annak központja).
A spórás aerob rudak (B. subtilis és mások) könnyen azonosíthatók, miután a vizsgált anyagot 80 °C-on 30 percig melegítik. Ezután a felmelegített anyagot sem MPA-val, sem 1MPB-vel nem vetik be, és a szokásos inkubációt követően (37 °C, oxigénhez jutva) ezeknek a bacilusoknak a jelenlétét a táptalaj felületén, film formájában történő növekedésük határozza meg. az MPB-n).
Az állat testének különböző területeiről származó anyagokban lévő corynebaktériumok számát Buchin táptalaj segítségével lehet meghatározni (kész formában a Dagestan Institute of Dry Nutrient Media cégtől). Akár 5% steril vérrel dúsítható. A Neisseria kimutatása Bergea risztomicint tartalmazó táptalajon történik: adjunk 1% desztillált vízben sterilen oldott maltózt 1 liter olvadt Hottinger agarhoz (kevésbé kívánatos MPA) (10 g maltózt minimális mennyiségű vízben fel lehet oldani és vízfürdőben felforralni ), 15 ml 2%-os vizes kék (anilinkék vízoldható) oldata, risztomicin oldata; számítás 6,25 egység. 1 ml táptalajra. Keverjük össze, ne sterilizáljuk, öntsük steril Petri-csészékbe vagy kémcsövekbe. A Neisseria nemzetség gram-negatív coccusai kis és közepes méretű, kék vagy kék színű telepek formájában nőnek. A Hemophilus baktériumokat csokoládéagar (lóvérből) táptalajon izolálhatjuk bacitracin szelektív szerrel. .
Módszerek feltételesen patogén mikroorganizmusok (Pseudomonas aeruginosa, Proteus, Klebsiella stb.) kimutatására. Jól ismert vagy a legtöbb bakteriológiai kézikönyvben megtalálható.
IRODALOM
Alapvető
Baltrashevich A. K. et al. Sűrű, vér nélküli tápközeg és félig folyékony és folyékony változatai bakteroidok tenyésztéséhez / A Szovjetunió Orvostudományi Akadémia Kísérleti Biológiai Modellei Tudományos Kutatólaboratóriuma. M. 1978 7 p. Bibliográfia 7 cím Dep. VNIIMI 7.10.78., 1823. D. sz.
Goncharova G. I. A B. bifidum termesztési módszeréhez // Laboratóriumi üzlet. 1968. № 2. S. 100-1 D 2.
Útmutató az opportunista enterobaktériumok és szalmonellák izolálásához és azonosításához fiatal haszonállatok akut bélbetegségeiben / E. N. Blokhina, S. Voronin et al. KhM: MVA, 1990. 32 p.
Petrovskaya V. G., Marko O. P. Emberi mikroflóra normál és patológiás körülmények között. Moszkva: Orvostudomány, 1976. 221 p.
Chakhava O. V. és munkatársai: A gnotobiológia mikrobiológiai és immunológiai alapjai. Moszkva: Orvostudomány, 1982. 159. o.
Knothe H. u. a. Vaginales Keimspektrum//FAC: Fortschr. antimlkrob, u. Antirieoplasztikus kemoterápia. 1987. Bd. 6-2. S. 233-236.
Koopman Y. P. et al. Associtidn of germ-free rats with different rnicrofloras // Zeitschrift fur Versuchstierkunde. 1984. Bd. 26., 2. sz. S. 49-55.
Varel V. H. Rostbontó mikroorganizmusok aktivitása sertés vastagbélben//J. Anim. Tudomány. 1987. V. 65, N 2. P. 488-496.
További
Boyd M. E. Posztoperatív nőgyógyászati fertőzések//Can. J. Surg. 1987.
V. 30., 'N 1. P. 7-9.
Masfari A. N., Duerden B, L, Kirighorn G. R. A hüvelyi baktériumok kvantitatív vizsgálatai//Genitourin. Med. 1986. V. 62, N 4. P. 256-263.
Methods for quantitative and assessment of qualitative of vaginal micro-fiora during menstruation / A. B. Onderdonk, G. A. Zamarchi, Y. A. Walsh et al. //Alk. és Environ. mikrobiológia. 1936. V. 51, N 2. P. 333-339.
Miller J. M., Pastorek J. G. A membránok idő előtti szakadásának mikrobiológiája//Clin. obstet. és Gyriecol. 1986. V. 29, N 4. P. 739-757.
A közelmúltban jelentősen megnőtt az érdeklődés a mezőgazdasági és háziállatok őshonos (saját) mikroflórája és korrekciós módszerei iránt. Az állatok és az ember létezésének lehetőségét mikroorganizmusok hiányában először Louis Pasteur vetette fel (10. idézi). Alapján modern ötletek, természetes élőhelyen szükséges egy makroorganizmus szimbiózisa az azt lakó mikroflórával. A nem mikrobiális állatok (és növények) csak mesterséges elkülönítés (steril környezet) körülményei között élhetnek és fejlődhetnek. Az állatok és az emberek normális mikroflórája folyamatosan megmarad az egészséges gazdaszervezetben, és a szimbiózis elve szerint kölcsönhatásba lép vele. Az őshonos flórát mikrobiocenózisok (egyes mikroorganizmus-közösségek) képviselik, amelyek a külső környezettel érintkezve a makroorganizmus élettani rendszereinek (emésztőrendszer, légző- és urogenitális apparátus, bőr stb.) természetes fülkéiben (biotópjaiban) képződnek. Minden mikrobiocenózisban megkülönböztetünk egy adott fajra jellemző (obligát, rezidens) és egy alkalmi (fakultatív, átmeneti, átmeneti) mikroflórát. Mindegyik biotópban saját, a többitől eltérő feltételek alakulnak ki a bennük lakó mikroorganizmusok létezésére és kölcsönhatására. Ezért a különböző biocenózisokban a flóra faji és mennyiségi összetétele jelentős eltéréseket mutat. E tekintetben vannak olyan fogalmak, mint a belek, a bőr, a nemi szervek, a felső légutak, a szájüreg mikroökológiája stb. Az élő szervezetben hatalmas számú szimbionta mikroorganizmus sejt található (eléri az 1014-et). Fajdiverzitásuk (több mint 400 faj) biztosítja a normál mikroflóra részvételét a makroorganizmus sokféle élettani funkciójában (13, 14). A normál mikroflóra egyik legfontosabb funkciója a kolonizációs rezisztencia (CR) biztosítása mind a gazdaszervezetbe behatoló idegen mikroorganizmusokkal szemben, mind az egyes képviselőinek élőhelyükön kívüli szaporodásának korlátozása. A CR csökkenésével egyensúlyhiány lép fel az őshonos flóra minőségi és mennyiségi összetételében. A mikroorganizmusok egyedi populációinak növekedése miatt ez utóbbiak megtelepednek a makroorganizmus bőrén és nyálkahártyáján, és megjegyzik az opportunista (feltételesen patogén) mikroflóra képviselőinek elterjedési területének bővülését, beleértve az aerobokat és a nyálkahártyákat is. anaerobok, transzlokációjuk belső szervek . Ez gennyes-gyulladásos folyamatokhoz, szeptikémiához vezet. Egyre növekszik az antibiotikum-rezisztencia és a patogenitási faktorok bakteriális közösségek közötti átvitele (1, 8, 16). Az emlősök legösszetettebb mikrobiocenózisai a vastagbél, a száj és a nasopharynx mikroflórája. A bőr felszínének mikroflórájának minőségi és mennyiségi összetétele, valamint az orrüreg nyálkahártyája, a nemi szervek stb. szűkösebb. Ezért a bél őshonos mikroflórája jelentős hatással van az élő szervezet más biotópjainak mikrobiocenózisainak állapotára. Egészséges felnőtt kutya gyomor-bél traktusának normál flórájának összetétele (1. táblázat) stabil, és a takarmányozási, tartási körülmények, a stresszes helyzetek, valamint a farmakológiai készítmények használatával járó betegségek jelentős változása nélkül. , enyhén ingadozik. A magas savtartalom miatt a gyomor mikrobiocenózisa meglehetősen rossz. Azok a mikroorganizmusok, amelyek élettevékenységüket savas környezetben és pepszin jelenlétében képesek fenntartani (acidophilus bacillus és más laktobacillusok, enterococcusok, gombák, bacillusok, sarcinok) elsősorban a pylorus részében lokalizálódnak. A nyombélben és a jejunumban található mikroorganizmusok fajlagos száma 102-105 baktérium 1 gramm tartalomra vonatkoztatva. A vékonybél ezen részében növekedésük gátlását a savasabb környezet biztosítja, amelyet a chyme (gyomortartalom) bejutása és az epesavak felszabadulása tart fenn. Az aktív perisztaltika, a szekréciós immunglobulinok (IgA, IgE) és az enzimek közvetlenül részt vesznek a mikroorganizmusok számának szabályozásában. A fő lakosok - laktobacillusok, enterococcusok, enterobaktériumok, steptococcusok, mennyiségi reprezentációjukban kissé rosszabbak a bifidobaktériumoknál, néha előfordul a candida. Hasonló helyzet figyelhető meg az ileum cranialis részén, míg a caudalis mikrobiocenózis sokkal változatosabb, és gyakran túlnyomórészt a vastagbélben élő fajokat (bakteroidok, clostridiumok, eubaktériumok, fuzobaktériumok stb.) foglal magában. A mikroorganizmusok fajlagos tartalma ezen a területen elérheti a 107-et 1 g béltartalomra vonatkoztatva. El kell mondanunk, hogy a vastagbél mikrobioszenozindigén flórája a vékonybélhez képest mind minőségi, mind mennyiségi szempontból jelentős túlsúlyban van. Az 1. táblázatban említetteken kívül szinte mindig megtalálhatók a Veiolonella, Peptococcus, Peptostreptococcus, Actinomycetes, Pseudomonas, Alkaligenes és más nemzetségek képviselői (11). A végbél felé haladva nő a baktériumok fajlagos tartalma (1 g tartalomra 1010-1012 mikrobasejt). A bélsár nedvességtartalmától függően a baktériumtömeg százalékos aránya a vizsgált anyag teljes tömegéhez viszonyítva 15-30%. Ez a cikk elsősorban egy 2-7 éves kutyák bélmikroökológiai vizsgálatának eredményeit javasolja. Speciális figyelem a normál mikroflórának adták. A következő számokban a bél őshonos flórájának életkori dinamikájáról, a dysbacteriosis (CR csökkenése) kialakulásának okairól és azok korrekciós módjairól tervezünk anyagokat bemutatni. A kapott eredmények azt mutatják, hogy a kutyák normál bélmikroflórája, más állatokhoz hasonlóan, nem spóraképző kötelező anaerob mikroorganizmusokon alapul. Az anaerob-aerob bélflóra képviselőinek aránya rendesen körülbelül 1000:1. A gasztrointesztinális traktus rezidens flórájának legfontosabb képviselői a bifido- és laktobacillusok, a bakteroidok, az enterococcusok, az Escherichia és az élesztőszerű gombák (9). Bifidobaktériumok A bifidobaktériumok alkotják a normál bélflóra többségét (60-90% vagy több) egészséges kutyákban, valamint más monogasztrikus állatokban (1. ábra). Általában a kutyák vastagbél tartalmának 1 grammjából (életkortól, takarmányozási módtól, stb. függően) 1012-ig vetették el őket. Az állatorvosoknak figyelniük kell arra, hogy a széklet mikroszkópos vizsgálata speciális kenetfestéssel A módszerek csak hozzávetőleges képet adnak a mikroorganizmusok fő csoportjainak arányáról (coccusok, gram-pozitív és gram-negatív baktériumok, gombák stb.) A bifidoflora jelenléte vagy hiánya ezzel a módszerrel nem állapítható meg, mert morfológiai hasonlóságokat mutat számos más baktériummal – obligát bélmikroorganizmussal (1. melléklet). A bifidoflóra mennyiségi meghatározását úgy végezzük, hogy a vizsgálati anyag tízszeres hígításait elektív (speciális) félfolyékony táptalajokra vetjük, amelyeket magas (legalább a kémcső magasságának kétharmadába) öntünk. ) oszlopot és vetés előtt regeneráljuk (felmelegítjük). A bakteriológiai vizsgálatnak alávetett anyagot óvatosan a kémcső alsó részébe helyezzük, amelynek tartalmát enyhén összekeverjük, az anaerobiózis körülményeinek megfigyelése mellett, majd az optimális hőmérsékleten 1-3 napig inkubáljuk. Ez a fajta kutatás magas bakteriológus szakképzettséget és gyakorlati készségeket igényel. Figyelembe véve a bifidoflóra domináns helyzetét az egészséges egyének bélrendszerében, valamint a klinikai és mikrobiológiai vizsgálatok adatait, számos szerző arra a következtetésre jutott, hogy a bifidobaktériumok nemzetség képviselői a gyomor-bél traktus mikroflórájának fő taxonómiai csoportját alkotják. az egészség mutatója (4). Valójában a CR csökkenésével a bifidoflora tűnik el először a gyomor-bél traktusból. Ezeknek a mikroorganizmusoknak a túlsúlya a bélben általában megakadályozza a patogén és opportunista baktériumok szaporodását, normalizálva a mikrobiocenózis egészét. A bifidobaktériumok antagonista hatását a canterobaktériumokhoz (Escherichia, Klebsiella, Salmonella, Proteus, Shigella stb.), coccusokhoz (Srepto-, Staphylococcusokhoz), Vibriosokhoz, Campylobacterekhez, Clostridiákhoz és más mikroorganizmusokhoz kapcsolódó kórokozókkal szemben a szénhidrát-acetát képződése biztosítja. és laktát, illékony zsírsavak (VFA-k), lizozimszerű és egyéb antibakteriális hatású anyagok termelése, valamint a toxinképződés elnyomására vagy a kórokozó baktériumok toxinjainak elpusztítására való képesség stb. Különös hangsúlyt kell fektetni a makroorganizmussal való szimbiózisban való részvételükre a parietális emésztés szintjén, amelyet a jól kifejezett tapadó tulajdonságok határoznak meg. Ez a versenyképesség egyik fő eleme az élelmiszer-rés kialakításában az őshonos flóra és kórokozók más képviselőihez képest. A bifidobaktériumok közvetlenül részt vesznek a makroorganizmus immunfunkcióinak szabályozásában. Serkentik a limfoid szöveti sejtek proliferációját, fokozzák a makrofágok, monociták és granulociták fagocita aktivitását, fokozzák a specifikus humorális immunitást, a citokin szintézist (gamma-interferon, JL-6, TNF, ALPHA termelődését), valamint stimulálják az immunmechanizmusokat a sejtben. szint, beleértve a daganatellenes védelmet (7, tizenöt). Az őshonos flóra más képviselőihez hasonlóan a bifidobaktériumok is képesek az epesavak dekonjugációját okozni. Aktívan részt vesznek a víz-só, fehérje, zsír, nukleotid, vitamin anyagcserében, a pH fenntartásában és a bél anaerobiózisában. Olyan aminosavakat szintetizálnak, mint a lizin, arginin, valin, metionin, leucin, tirozin és glutaminsav. Az esszenciális aminosavak aránya ezek teljes mennyiségének körülbelül 40%-át teszi ki. Az intracelluláris bifidobaktériumok felhalmozzák a B1-, B2-, B6-, B12-, C-vitamint, nikotint, folsavat és biotint, valamint B6-, B12- és folsavat termelnek a táptalajba. E nemzetség képviselőinek hiánya esetén a K-vitamin endogén képződésének szintézise csökken, ami a véralvadási folyamatok megzavarásához vezet. A bifidobaktériumok rövid leírása azt jelzi, hogy a makroorganizmus normál flórájának egyik változataként nemcsak mennyiségileg, hanem minőségileg is (fiziológiailag) dominálnak. A kutyaürülékből izolált bifidobaktériumok fajazonosítása során kimutattuk, hogy a B.adolescentis volt az uralkodó faj (a törzsek 41,7%-a), a B.globosum a második legnagyobb (16,7%), a B.termophilum a harmadik (8, 3%). Egyik esetben sem sikerült kutyákból izolálni a B. bifidum fajhoz tartozó, az emberi bélrendszerre jellemző bifidobaktériumokat, amelyeket a humanitárius gyógyászatban probiotikus készítmények előállítására használnak. Lactobacillusok A kutyák gyomor-bél traktusának rezidens flórájának második legnagyobb és nyilvánvalóan legfontosabb csoportja a tejsavbaktériumok, a Lactobacterium nemzetség képviselői (2. melléklet). Vizsgálataink szerint egészséges kutyákban a laktobacillusok mennyisége 106-109/g vastagbéltartalomra vonatkoztatva (1. ábra). A CR (dysbacteriosis) csökkenésével a laktobacillusok jóval kisebb mennyiségben vetődnek el, vagy egyáltalán nem mutathatók ki (2. ábra). A tejsavbaktériumok, mint a gyomor-bél traktus kötelező képviselői, aktívan részt vesznek a benne lezajló folyamatokban. Nagy mennyiségű szénhidrátot és alkoholt fermentálnak, e nemzetség egyes képviselői keményítő hidrolízisét okozzák és fehérjéket szintetizálnak. A tejsavbaktériumok rothadó, patogén és opportunista mikroflórával szembeni antagonista aktivitása annak köszönhető, hogy képesek számos antibiotikus anyagot szintetizálni. Némelyikük az alacsony molekulatömegű fehérjékhez tartozik. A bakteriocinok közé sorolták őket, hatásmechanizmusukban hasonlóak az antibiotikumokhoz, de eltérnek tőlük a közeli rokon típusú mikroorganizmusokkal szembeni alacsony aktivitásukban (3. melléklet). Az acidofil baktériumok bakteriocinjei fizikai-kémiai tulajdonságainak jellemzése lehetővé tette a „Lactacin B” elnevezéssel történő kombinálását. Ezenkívül a laktobacillusok antimikrobiális anyagokat, úgynevezett lantabiotikumokat termelnek. Kevésbé érzékenyek az amilázokra és proteinázokra, és olyan aminosavakat tartalmaznak, amelyek általában nem találhatók meg a bakteriocinokban. A lactobacillusok a bakteriocinek és a lantabiotikumok mellett azonosítatlan anyagokat szintetizálnak bakteriocin-szerű hatással. Ezek az alacsony molekulatömegű szerves vegyületek nem fehérje természet mutatják aktivitásukat sav vagy hidrogén-peroxid jelenlétében. Gátolják a pszeudomániák, szalmonella, shigella, streptococcusok, staphylococcusok növekedését és fejlődését, valamint anaerob baktériumok , beleértve a clostridiumokat, bifidobaktériumokat és bakteroidokat. A tejsavbaktériumok egyik legfontosabb anyagcsereterméke a hidrogén-peroxid. Az előállítási képességet egy genetikailag meghatározott tulajdonság határozza meg, és nem függ a fő környezettől és az oxigénnel való érintkezéstől. A hidrogén-peroxid gátló hatása a bélben fontosabb az aerob flóra bőségének szabályozásában, mint az általa termelt szerves savak hatása. A hidrogén-peroxid baktériumölő hatása a baktériumsejtekre gyakorolt erős oxidáló hatásával és a sejtfehérjék alapvető molekuláris szerkezetének tönkretételével függ össze. A laktobacillusok fontos szerepet játszanak az immunitás kialakulásában olyan újszülötteknél, akiknek alacsony a celluláris és humorális immunitása, és alacsony a mononukleáris makrofágok fagocitaaktivitása. Élő laktobacillusok, felülúszók, elölt tenyészetek vagy falaik fragmentumai orális, szubkután és intraperitoneális beadásakor a makrofágok fagocitikus aktivitásának növekedését, az antigének befogását és katabolizmusát figyelték meg. In vitro és in vivo körülmények között a tejsavbaktériumok serkentik az interferonok és interleukinok termelését (3, 7). A felsorolt, a kórokozókkal szemben immunstimuláló és antagonista hatást biztosító tulajdonságokon kívül a laktobacillusok más fontos élettani funkciókat is ellátnak. Aktívan részt vesznek a szénhidrátok, fehérjék, lipidek, nukleinsavak anyagcseréjében. Ezek, valamint a bifidobaktériumok fontos szerepet játszanak a víz-só anyagcsere szabályozásában, a pH és a bél anaerobiózisának fenntartásában, az epesavak dekonjugációjában, a vitaminok, aminok és más biológiailag aktív vegyületek szintézisében. Az általunk vizsgált, kutyaürülékből izolált lactobacillus törzsek többsége a L.acidophilum fajhoz (56%) tartozik, a második legnagyobb az L.plantarum faj (16%), a harmadik a L.helveticum (12%). ). Az Escherichia olyan szaprofiták, amelyek általában a bélflóra részei. Véletlenszerűen és egyenletesen oszlanak el a bélüregben, elsősorban a lumenben lokalizálódnak, és csak részben szomszédosak a bolyhok hámjával. A bifido- és laktobacillusokhoz hasonlóan az Escherichia is aktívan részt vesz a bél enzimatikus folyamataiban, miközben szerves savakat, vitaminokat és más biológiailag aktív anyagokat képez. 1905-ben H. Conrad megállapította, hogy az Escherichia élete következtében a tápközegben baktériumölő anyagok halmozódnak fel, megakadályozva más baktériumok szaporodását. Ma már ismert, hogy az Escherichia in vitro és in vivo is 24 féle ilyen anyagot, úgynevezett colicint termel. Talán a bélflórát nem szaprofita, hanem feltételesen patogénnek kell nevezni, mivel a mikroorganizmusok ebbe a kategóriájába tartozó többi képviselővel összehasonlítva ez a legagresszívabb: az Escherichia az elsők között él a testben születés után, és gyakrabban, mint mások olyan állatok vérében találhatók, amelyeknél csökkent a természetes immunitás, például besugárzás után. Így a szerzők (2, 5) szerint az esetek több mint 50%-ában a besugárzott állatok vérmérgezésének okozói. Emlékeztetni kell arra, hogy az Escherichia nagy része állandóan kifejezett magas virulenciájú kórokozó (4. melléklet). Az egészséges kutyák bélrendszerének különböző szakaszaiban az Escherichia száma 102 és 109 telepképző egység között ingadozik 1 g vizsgálati anyagra vonatkoztatva. Egészséges kutyákon végzett saját vizsgálatok azt mutatják, hogy az Escherichia száma 106-109/gramm széklet között ingadozik. Bakteroidok A gasztrointesztinális traktus, valamint a szájüreg, a felső légutak, a húgyúti szervek normál mikroflórájának összetétele magában foglalja a bakteroidokat. A Bacteroides nemzetségbe több mint 20 faj tartozik, amelyek többségét emberekből és állatokból izolálják. Savas körülmények között a bakteroidok antagonista hatást fejtenek ki Salmonella, Escherichia és más mikroorganizmusok ellen, és nyilvánvalóan jelentős szerepet játszanak a szervezet fertőzésekkel szembeni ellenálló képességében. A legújabb vizsgálatok eredményei azonban azt mutatják, hogy részt vesznek számos kóros folyamat etiológiájában: enteritis, necroticus hepatitis, peritonitis, meningitis stb. e) Az e nemzetség képviselőinek patogenitásának vizsgálata állatokon szinergizmust jelez a fertőző folyamatok kialakulásában, amelyet a borrelia, a mikoplazmák, a streptococcusok, a staphylococcusok, a pasteurella és az emberben a kolera vibrio kapcsán figyeltek meg (6). Az egészséges kutyák vastagbél tartalmának 1 grammjában számuk 107-1010 között mozog. Enterococcusok A székletben előforduló streptococcusok vagy enterococcusok széles körben elterjedtek a természetben. Megtalálhatók az emberek és állatok belében és ürülékében, valamint a talajban és a vízben. Az enterococcusok a gasztrointesztinális traktus normál mikroflórájának kötelező képviselői, és egy részük (főleg az Ent. faecium) a bél mikroflóra normalizálására szolgáló probiotikus készítmények összetételében is szerepel. E mikroorganizmusok antagonista funkciói elsősorban savképző tulajdonságaikkal és bakteriocin-termelő képességükkel függnek össze. Ugyanakkor az enterococcusok fakultatív anaerob, feltételesen patogén mikroorganizmusok, amelyek gastroenteritist, tüdőgyulladást, tőgygyulladást, endocarditist, agyhártyagyulladást, vérmérgezést és más betegségeket okozhatnak állatokban és emberekben. Mint minden feltételesen patogén mikroorganizmusra jellemző, negatív hatásuk az általános rezisztencia csökkenésével rendelkező egyénekben nyilvánul meg. Az ilyen típusú mikroorganizmusok képviselőinek tartalma egészséges kutyákban 104-108 / g széklet (saját kutatás). Clostridiumok Legfeljebb 35 Clostridium-faj található állatokban és emberekben. Az egyes fajok (Cl.clostridiforme, Cl.innocuum, Cl.ramosum) mennyiségi mutatója elérheti a 108-109/g ürüléket (11). Saját kutatásunk szerint a Clostridium kutyák beleiből történő izolálásának gyakorisága az esetek 75-100%-a között mozgott. Fajlagos tartalmuk a különböző metszetekben 0 és 104/g között mozgott a vizsgált anyagra vonatkoztatva. jellemző tulajdonság A clostridia a talajban és az emberek és állatok gyomor-bél traktusában való szaprofita képessége. E nemzetség képviselőinek szerepét a makroorganizmusban (a kórokozó fajok kivételével) nem vizsgálták kellőképpen. A szakirodalmi adatok a clostridium-vitaminok szintézisére utalnak: nikotin, folsav, pantoténsav és riboflavin (12). Ezért természetes az a feltételezés, hogy a clostridiumok is részt vesznek gazdájuk bélnormobiózisának fenntartásában. Sőt, egyes szerzők úgy vélik, hogy a klostrídiumok, különösen azok a fajok, amelyek száma elérheti a nagy számot, az emberi és állati mikroökológia legősibb szabályozási rendszere, amely homeosztatikus kapcsolatokat biztosít a gazdaszervezet és a mikroflóra között. A Candida nemzetséghez tartozó gombák A Candida nemzetség élesztőszerű gombái önálló nemzetséget alkotnak, és több mint 80 fajt foglalnak magukban. A normál flóra részei, amely a légzőszervek és a gyomor-bél traktus nyálkahártyáján, valamint a nemi szerveken és a bőrön él. Egészséges kutyák ürülékéből 103, ritkán 104/g mennyiségben vetettük el. A Candida nemzetség gombái szintén a feltételesen patogén mikroorganizmusokhoz tartoznak, és minden olyan tényező, amely csökkenti a makroorganizmus általános vagy kolonizációs rezisztenciáját, és gátolja a nem specifikus immunvédelmet, feltételeket teremt növekedésük aktiválásához és egy adott betegség - a candidiasis - kialakulásához. A majmokon és kutyákon végzett kísérletek kimutatták, hogy ezek a mikroorganizmusok a bélrendszer nyálkahártyáján keresztül bejuthatnak a gazdaszervezetbe, és bejuthatnak a véráramba. A betegség patogenezisében jelentős jelentőséggel bír a parenchymalis szervek károsodását okozó endotoxin. A fent felsorolt mikroorganizmuscsoportok alkotják az állatok gyomor-bél traktusának többé-kevésbé vizsgált rezidens mikroflórájának fő részét. Ugyanakkor meg kell jegyezni, hogy csak a bifidobaktériumok és a laktobacillusok olyan mikroorganizmusok, amelyek részvétele a kóros folyamatokban (mind közvetlen, mind közvetett) a mai napig nem bizonyított. A gasztrointesztinális traktusban rezidens mikroflórán kívül szórványosan előfordulnak egyéb, átmenetinek nevezett mikroorganizmusok is, amelyek leggyakrabban állatok gyomor-bélrendszeri betegségeiben vetődnek el, bár előfordulnak köztük szaprofita mikrobafajok is. Először is ezek a Klebsiella, Pseudomonas, Proteus, Staphylococcusok, Spirochetes, Citrobacter, Enterobacter, penészgombák és mások. A kutyák rezidens mikroflórájának mennyiségi diverzitását, a rezidens és tranziens mikroflóra adott biotópjának mikrobiocenózisában a számszerű arányt elsősorban az életkor, a takarmányozás típusa és a különböző környezeti tényezők, köztük a felhasználás befolyásolja. gyógyszerek. Míg a mikrobiocenózisokban a normál mikroflóra képviselői dominálnak, a CR és a makroorganizmus egészének egészsége megmarad. Ha a külső hatások (kemoterápiás gyógyszerek, peszticidek és egyéb mérgek, stressz, virulens mikroorganizmusok stb.) intenzitásukban meghaladják az ökológiai rendszer "makroorganizmus - normális mikroflórája" kompenzációs mechanizmusait, akkor a tranziens mikroflóra kezd dominálni a mikrobiocenózisokban, ami elvezet lokális fertőző folyamatok kialakulásához, vagy akár generalizált fertőzéshez és egyéb szövődményekhez. Nyilvánvaló tehát, hogy az állati szervezet és a benne lakó mikroflóra egyetlen rendszer egymásra utalt és egymás mellett létező részei. Ökológiai szempontból a makro- és mikroorganizmusok kölcsönhatása az élővilágban általánosan elterjedt szimbiózis sajátos esete. különféle formák(kommenzalizmus, kölcsönösség, parazitizmus, ragadozás stb.). A fentiek alapján az következik, hogy a normál mikroflóra és a gazdaszervezet közötti kölcsönhatás túlnyomórészt a kölcsönösség szintjén valósul meg. A bélmikroorganizmusok, mint a normoflóra részei, egyúttal egy komplex önszabályozó nyitott rendszert képviselnek, ahol különböző populációik változatos kapcsolatban állnak mind közösségeik szintjén, mind a gazdaszervezettel. A legtöbb kiemelkedő szerepet játsszák versengő-antagonista tulajdonságaikat, ami alapvetően egyetlen ökológiai rendszer normális működését határozza meg: az állati szervezet a környezete.
Intizarov Mihail Mihajlovics, az Orosz Mezőgazdasági Tudományos Akadémia akadémikusa, prof..
ELŐSZÓ
Amikor számos bakteriális és vírusos etiológiájú fertőző betegség leküzdésének módjait mérlegelik, gyakran a patogén mikroorganizmusokra összpontosítanak - ezek a betegségek kórokozói, és ritkábban fordítanak figyelmet az állati test normál mikroflórájára. De bizonyos esetekben a közönséges mikroflóra az, amely nagy jelentőséggel bír a betegség előfordulásában vagy kialakulásában, hozzájárulva vagy megakadályozva annak megnyilvánulását. Néha a szokásos mikroflóra olyan kórokozó vagy opportunista fertőző ágensek forrásává válik, amelyek endogén fertőzést, másodlagos fertőzések megnyilvánulását stb. néhány kórokozó mikroorganizmus által okozott fertőző folyamat. Ezért az orvosoknak, biológusoknak, állattenyésztőknek, egyetemi tanároknak és tudósoknak ismerniük kell a szervezet (emlősök, beleértve a háziállatokat, haszonállatokat és embereket) különböző csoportjainak és a normál mikroflóra képviselőinek összetételét, tulajdonságait, mennyiségi jellemzőit, biológiai jelentőségét.
Bevezetés
Az emlősök, köztük a mezőgazdasági, háziállatok és emberek szervezetének mikroflóráját a mikrobiológia mint tudomány fejlődésével párhuzamosan kezdték vizsgálni, L. Pasteur, R. Koch, I. I. Mechnikov nagy felfedezéseinek megjelenésével. diákok és alkalmazottak. Tehát 1885-ben T. Escherich a gyermekek ürülékéből izolálta a bél mikroflóra kötelező képviselőjét - az Escherichia colit, amely szinte minden emlősben, madarakban, halakban, hüllőkben, kétéltűekben, rovarokban stb. megjelent a bélpálcikák fontossága a létfontosságú tevékenység, a makroorganizmus egészsége szempontjából. S. O. Jensen (1893) megállapította, hogy az E. coli különböző típusai és törzsei egyszerre lehetnek kórokozók az állatok számára (szeptikus betegséget és hasmenést okoznak a borjakban), és nem patogének, azaz teljesen ártalmatlanok, sőt jótékony hatásúak is lehetnek az állatok és egy ember beleiben. . 1900-ban G. Tissier felfedezte az újszülöttek székletében a bifizhbakter "és - meszet: és a szervezet normális bélmikroflórájának kötelező képviselőit élete minden időszakában. A tejsavrudakat (L. acidophilus) Moreau izolálta 1900-ban.
Definíciók, terminológia
A normál mikroflóra az egészséges emberekben és állatokban található mikroorganizmusok nyílt biocenózisa (V. G. Petrovskaya, O. P. Marko, 1976). Ennek a biocenózisnak egy teljesen egészséges szervezetre kell jellemzőnek lennie; fiziológiás, azaz segíti a makroorganizmus egészséges állapotának megőrzését, normál élettani funkcióinak megfelelő beadását. Az állat testének teljes mikroflóráját automikroflórának is nevezhetjük (az "auto" szó jelentése szerint), vagyis az adott szervezet bármilyen összetételű mikroflórájának (O.V. Chakhava, 1982), normális és kóros állapotokban.
A normál mikroflórát, amely csak a szervezet egészséges állapotához kapcsolódik, számos szerző két részre osztja:
1) kötelező, állandó rész, amely a filogenezisben és az ontogenezisben alakult ki ban ben az evolúció folyamata, amelyet bennszülöttnek (azaz lokálisnak), őshonosnak (bennszülöttnek), rezidensnek stb. is neveznek;
2) opcionális vagy átmeneti.
A makroorganizmusba véletlenül behatoló patogén mikroorganizmusok időszakosan bekerülhetnek az automikroflóra összetételébe.
Fajösszetétel és mennyiségi jellemzőkaz állati test legfontosabb területeinek mikroflórája
Általában több tucat és több száz különféle mikroorganizmusfaj kapcsolódik az állati szervezethez. Ők , ahogy V. G. Petrovskaya és O. P. Marko (1976) írja, ezek kötelezőek a szervezet egészére nézve. Sokféle mikroorganizmus található a test számos területén, és csak mennyiségileg változnak. Ugyanabban a mikroflórában az emlős típusától függően mennyiségi eltérések lehetségesek. A legtöbb állatot általános átlagok jellemzik testük számos területén. Például a gyomor-bél traktus disztális, alsó részeit a következő mikrobacsoportok jellemzik, amelyeket a béltartalomban vagy a székletben mutatunk ki (1. táblázat).
A táblázat tetején 1. csak kötelező anaerob mikroorganizmusokat adnak - a bélflóra képviselőit. Mára megállapították, hogy a szigorúan anaerob fajok a bélben 95-99%-ot, míg a maradék 1-5%-ot teljesen aerob és fakultatív anaerob fajok teszik ki.
Annak ellenére, hogy több tucat és száz (akár 400) ismert típusú mikroorganizmus él a belekben, ott teljesen ismeretlen mikroorganizmusok is előfordulhatnak, így egyes rágcsálók vakbélében és vastagbélében az úgynevezett fonalas szegmentált baktériumok jelenléte. , amely szorosan kapcsolódik a bélnyálkahártya hámsejtjeinek felszínéhez (glikokalix, ecsetszegély). Ezeknek a hosszú, fonalas baktériumoknak a vékony vége a hámsejtek kefeszegélyének mikrobolyhai közé süllyed, és úgy tűnik, hogy ott rögzül oly módon, hogy megnyomja a sejtmembránokat. Ezek a baktériumok olyan sokak lehetnek, hogy a fűhöz hasonlóan beborítják a nyálkahártya felületét. Ezek is szigorú anaerobok (a rágcsálók bélmikroflórájának kötelező képviselői), a szervezet számára hasznos fajok, amelyek nagyrészt normalizálják a bélműködést. Ezeket a baktériumokat azonban csak bakterioszkópos módszerekkel (a bélfal szakaszainak pásztázó elektronmikroszkópiájával) mutatták ki. A fonalas baktériumok nem szaporodnak az általunk ismert táptalajokon, csak sűrű agar táptalajon képesek életben maradni egy hétnél tovább) J . P. Koopman et. al., 1984).
A mikroorganizmusok eloszlása a gyomor-bél traktusban
A gyomornedv magas savassága miatt a gyomor kis számú mikroorganizmust tartalmaz; Ez elsősorban egy saválló mikroflóra - laktobacillusok, streptococcusok, élesztő, szardínia stb. A mikrobák száma 10 3 / g tartalom.
A nyombél és a jejunum mikroflórája
A bélrendszerben mikroorganizmusok találhatók. Ha nem lennének egyik osztályon sem, akkor nem fordulna elő mikrobiális etiológiájú hashártyagyulladás, amikor a bél megsérül. Csak a vékonybél proximális részein található kevesebb fajta mikroflóra, mint a vastagbélben. Ezek a laktobacillusok, enterococcusok, szardínia, gombák, az alsó szakaszokon megnő a bifidobaktériumok, az Escherichia coli száma. Ez a mikroflóra mennyiségileg eltérő lehet a különböző egyéneknél. Minimális fokú szennyeződés lehetséges (10 1 - 10 3 / g tartalom), jelentős - 10 3 - 10 4 / g A vastagbél mikroflórájának mennyiségét és összetételét a táblázat tartalmazza. 1.
A bőr mikroflóra
A bőr mikroflórájának fő képviselői a diftériumok (korinebaktériumok, propionbaktériumok), penészgombák, élesztőgombák, spóra aerob bacilusok (bacillusok), staphylococcusok (elsősorban a S. epidermidis uralkodik, de az egészséges bőrön kis mennyiségben a S. aureus is megtalálható).
A légutak mikroflórája
A légutak nyálkahártyáján a mikroorganizmusok többsége az orrgaratban, a gége mögött sokkal kevesebb, a nagy hörgőkben még kevesebb, az egészséges szervezet tüdejének mélyén pedig nincs mikroflóra.
Az orrjáratokban difteroidok, elsősorban gyökérbaktériumok, állandó staphylococcusok (rezidens S. epidermidis), Neisseria, hemofil baktériumok, streptococcusok (alfa-hemolitikus); a nasopharynxben - corynebacteriumok, streptococcusok (S. mitts, S. salivarius stb.), staphylococcusok, neisseoii, vayloNella, hemofil baktériumok, enterobaktériumok, bakteroidok, gombák, enterococcusok, lactobacillusok, Pseudomonas a. subtilli típusúak. tranziens stb.
A légutak mélyebb részeinek mikroflóráját kevésbé vizsgálták (A - Halperin - Scott et al., 1982). Embereknél ez az anyagbeszerzés nehézségeiből adódik. Állatoknál az anyag jobban hozzáférhető a kutatáshoz (az elejtett állatok felhasználhatók). Egészséges sertésekben vizsgáltuk a középső légúti mikroflórát, beleértve azok miniatűr (laboratóriumi) fajtáját is; az eredményeket az 1. táblázat tartalmazza. 2.
Az első négy képviselőt folyamatosan (100%) észlelték, kevesebben (1/2-1/3 eset) telepedtek meg: laktobacillusok (10 2 -10 3), E. coli (10 2 -III 3), penészgombák ( 10 2 -10 4), élesztő. Más szerzők a Proteus, a Pseudomonas aeruginosa, a Clostridia, az aerob bacillusok képviselőinek átmeneti hordozását figyelték meg. Ugyanebben a tervben egyszer azonosítottuk a Bacteroides melaninoge - nicust.
Az emlősök születési csatornájának mikroflórája
Legutóbbi, főként külföldi szerzők által készített tanulmányok (Boyd, 1987; A. B. Onderdonk és mtsai, 1986; J. M. Miller és mtsai, 1986; A. N. Masfari et al., 1986; H. Knothe u A. 1987) kimutatták, hogy a kolonizáló mikroflóra (azaz lakik) a szülőcsatorna nyálkahártyája igen változatos és fajgazdag. A normál mikroflóra összetevői széles körben képviseltetik magukat, sok szigorúan anaerob mikroorganizmust tartalmaz (3. táblázat).
Ha a szülőcsatorna mikrobafajait összehasonlítjuk a test más területeinek mikroflórájával, azt tapasztaljuk, hogy az anya szülőcsatornájának mikroflórája ebből a szempontból hasonló a szervezet mikrobalakóinak fő csoportjaihoz. a leendő fiatal szervezetből, vagyis normál mikroflórájának kötelező képviselőiből az állat megkapja, amikor áthalad az anya születési csatornáján. A fiatal állat testének további megtelepedése az anyától kapott, evolúciósan alátámasztott mikroflóra fiasításából történik. Meg kell jegyezni, hogy egy egészséges nőstényben a méhben lévő magzat a szülés kezdetéig steril.
Az állat testének megfelelően kialakult (az evolúció során kiválasztott) normál mikroflórája azonban nem azonnal, hanem néhány napon belül benépesíti a testét, és van ideje bizonyos arányokban szaporodni. V. Brown a következő képződési sorrendet adja meg az újszülött életének első 3 napjában: a baktériumokat az újszülött testéből közvetlenül a születés után vett legelső mintákban találják meg. Tehát az orrnyálkahártyán eleinte a koaguláz-negatív staphylococcusok (S. epidermidis) voltak túlsúlyban; a garat nyálkahártyáján - ugyanazok a staphylococcusok és streptococcusok, valamint kis mennyiségű epterobaktérium. A végbélben az 1. napon már találtak E. colit, enterococcusokat, ugyanazokat a staphylococcusokat, a születést követő harmadik napon pedig mikrobiális biocenózis alakult ki, amely többnyire normális a vastagbél normál mikroflórájára nézve (W. Braun, F. Spenckcr u. a., 1987).
A különböző állatfajok testének mikroflórájának eltérései
A mikroflóra fenti kötelező képviselői a legtöbb házi, mezőgazdasági emlősre és az emberi szervezetre jellemzőek. Az állatfajtától függően inkább a mikrobacsoportok száma változhat, de a fajösszetételük nem. Kutyákban az Escherichia coli és a lactobacillusok száma a vastagbélben megegyezik a táblázatban láthatóval. 1. A bifidobaktériumok azonban egy nagyságrenddel kisebbek voltak (10 8/1 g), egy nagyságrenddel magasabbak voltak a streptococcusok (S. lactis, S. mitis, enterococcusok) és a clostridiumok. Patkányokban és egerekben (laboratóriumban) a tejsavbacilusok (laktobacillusok) száma ugyanannyival, több streptococcus és clostridium emelkedett. Ezekben az állatokban kevés Escherichia coli volt a bél mikroflórájában, és a bifidobaktériumok száma csökkent. Az Escherichia coli száma is csökken a tengerimalacokban (V. I. Orlovsky szerint). A tengerimalacok ürülékében kutatásunk szerint 10 3 -10 4/1 g Escherichia coli, 1 g-ban 2 laktobacillus volt.
Egészséges sertéseknél (adataink szerint) a légcső és a nagy hörgők mikroflórája sem mennyiségileg, sem minőségileg nem tért el szignifikánsan az átlagos mutatóktól, és nagyon hasonló az emberi mikroflórához. Bélmikroflórájukat is bizonyos hasonlóság jellemezte.
A kérődzők bendőjének mikroflóráját sajátos jellemzők jellemzik. Ez nagyrészt a baktériumok – rostbontó – jelenlétének köszönhető. Azonban a cellulolitikus baktériumok (és általában a fibrolitikus baktériumok), amelyek a kérődzők emésztőrendszerére jellemzőek, semmiképpen sem szimbiontái ezeknek az állatoknak. Tehát a sertések és sok növényevő vakbélben fontos szerepet játszanak a cellulóz- és hemicellulózrostok olyan, a kérődzőknél gyakori felhasadói, mint a Bacteroides succinogenes, a Ruminococcus flavefaciens, a Bacteroides ruminicola és mások (V. H. Varel, 1987).
A test normál mikroflórája és a kórokozó mikroorganizmusok
A fent felsorolt kötelező makroorganizmusok főként a pepatogén mikroflóra képviselői. Az e csoportokba tartozó fajok közül sokat a makroorganizmus szimbiontáinak is neveznek (laktobacillusok, bifeldobaktériumok), és hasznosak számára. Számos nem patogén clostridia, bakteroid, eubaktérium, enterococcus, nem patogén Escherichia coli stb. fajában azonosítottak bizonyos jótékony funkciókat. Ezeket és a test mikroflórájának más képviselőit „normális” mikroflórának nevezik. A kevésbé ártalmatlan, opportunista és magas patogenitású mikroorganizmusok azonban időről időre szerepelnek a makroorganizmusok élettani mikrobiocenózisában. A jövőben ezek a kórokozók:
a) többé-kevésbé hosszú ideig léteznek a szervezetben
az automikroflóra teljes komplexumának részeként; ilyenkor kórokozó mikrobák hordozója képződik, de mennyiségileg ennek ellenére a normál mikroflóra érvényesül;
b) a normál mikroflóra hasznos szimbiotikus képviselői kiszorítják (gyorsan vagy valamivel később) a makroorganizmusból, és eltávolítják őket;
c) szaporodnak a normál mikroflóra kiszorításával oly módon, hogy a makroorganizmus bizonyos fokú megtelepedésével a megfelelő betegséget okozhatják.
Az állatok és az emberek belében például a nem patogén klostrídiumok bizonyos típusai mellett a C. perfringens is kis számban él. Az egészséges állat teljes mikroflórájának részeként a C. perfringens mennyisége nem haladja meg a 10-15 milliót 1 g-onként, bizonyos körülmények között azonban, amelyek esetleg a normál mikroflóra megzavarásával járnak, a kórokozó C. perfringens elszaporodik az állaton. bélnyálkahártya nagy számban (10 7 -10 9 vagy több), anaerob fertőzést okozva. Ilyenkor még a normál mikroflórát is kiszorítja, és szinte tisztatenyészetben kimutatható a csípőbél nyálkahártyájának sárosodott katájában. Hasonló módon a bél coli fertőzés kialakulása a fiatal állatok vékonybélében történik, csak az Escherichia coli patogén típusai szaporodnak ott ugyanolyan gyorsan; kolerában a bélnyálkahártya felszínét a Vibrio cholerae stb.
A normál mikroflóra biológiai szerepe (funkcionális értéke).
A patogén és feltételesen patogén mikroorganizmusok az állat élete során időszakosan érintkeznek és behatolnak a testébe, és bekerülnek a mikroflóra általános komplexumába. Ha ezek a mikroorganizmusok nem tudnak azonnal betegséget okozni, akkor egy ideig együtt élnek a szervezet más mikroflórájával, de gyakrabban átmenetiek. Tehát a szájüregben a patogén és opportunista fakultatív tranziens mikroorganizmusok közül a P, aeruginosa, C. perfringens, C. albicans képviselői (az Esoherichia, Klebsiella, Proteus nemzetségek) lehetnek jellemzőek, a bélre pedig szintén egyenletesek. patogénebb enterobaktériumok, valamint B fragilis, C. tetani, C. sporogenes, Fusobacterium necrophorum, a Campylobacter nemzetség néhány képviselője, bélspirocheták (beleértve a patogén, feltételesen patogéneket) és még sokan mások. A bőrt és a nyálkahártyákat a S. aureus; a légutak számára - ez is pneumococcus stb.
A szervezet hasznos, szimbiotikus normál mikroflórájának szerepe és jelentősége azonban az, hogy ezeket a kórokozó fakultatív-tranziens mikroorganizmusokat nem könnyen engedi be környezetébe, az általa már elfoglalt térökológiai résekbe. A normál mikroflóra őshonos részének fenti képviselői az újszülöttnek az anya szülőcsatornáján való áthaladása során is elsőként foglalták el helyüket az állat testén, vagyis kolonizálták annak bőrét, gyomor-bélrendszerét. valamint a légutakat, a nemi szerveket és a test más területeit.
Az állati test patogén mikroflórájának kolonizációját (megtelepedését) megakadályozó mechanizmusok
Megállapítást nyert, hogy a normál mikroflóra őshonos, obligát részének legnagyobb populációi jellegzetes helyeket foglalnak el a bélben, egyfajta területet a bél mikrokörnyezetében (D. Savage, 1970). Tanulmányoztuk a bifidobaktériumok, bakteroidok ezt az ökológiai jellemzőjét, és azt találtuk, hogy nem egyenletesen oszlanak el a bélcsatornában a bélcső teljes üregében, hanem nyálkahártya (mucin) csíkokban és rétegekben terjednek el a nyálkahártya felszínének összes görbületét követve. a vékonybél membránja. Részben szomszédosak a nyálkahártya hámsejtjeinek felületével. Mivel a bifidobaktériumok, a bakteroidok és mások először a bél mikrokörnyezetének ezen alrégióit kolonizálják, sok, később a bélbe jutó kórokozó számára akadályt képeznek a nyálkahártyán való közeledésben és rögzítésben (tapadásban). És ez az egyik vezető tényező, hiszen bebizonyosodott, hogy patogenitásuk (betegséget okozó képességük) felismeréséhez minden kórokozó mikroorganizmusnak, beleértve a bélfertőzést okozókat is, meg kell tapadnia a bélhámsejtek felületén, majd szaporodjon rajta, vagy mélyebbre hatolva kolonizálja ugyanazokat vagy közeli alrégiókat, amelyek területén már hatalmas populációk alakultak ki, például bifidobaktériumok. Kiderült, hogy ebben az esetben egy egészséges szervezet bifidoflórája megvédi a bélnyálkahártyát egyes kórokozóktól, korlátozva azok hozzáférését a membrán hámsejtek felszínéhez és a hámsejtek receptoraihoz, amelyeken a kórokozó mikrobákat kell rögzíteni.
A normál mikroflóra autochton részének számos képviselője számára számos más antagonizmus mechanizmusa ismert a patogén és feltételesen patogén mikroflórával kapcsolatban:
Rövid szénatomláncú illékony zsírsavak előállítása (ezeket a normál mikroflóra szigorúan anaerob része képezi);
Szabad epe metabolitok képződése (laktobacillusok, bifidobaktériumok, bakteroidok, enterococcusok és még sokan mások képezhetik ezeket az epesók dekonjugálásával);
Lizozim termelése (jellemző a laktobacillusokra, bifidobaktériumokra);
A környezet elsavasodása, szerves savak előállítása során;
colicinek és bakteriocinek (streptococcusok, staphylococcusok, Escherichia coli, Neisseria, propionos baktériumok stb.) előállítása;
Különféle antibiotikum-szerű anyagok szintézise számos tejsav mikroorganizmus által - Streptococcus lactis, L. acidophilus, L. fermentum, L. brevis, L. helveticus, L. pjantarum stb.;
A kórokozó fajokhoz kapcsolódó nem patogén mikroorganizmusok versengése patogén fajokkal a makroorganizmus sejtjein lévő ugyanazon receptorokért, amelyekhez kórokozó rokonaikat is rögzíteni kell;
A szimbiotikus mikrobák felszívódása a normál mikroflóra összetételéből a kórokozó mikrobák életéhez szükséges egyes fontos összetevők és tápanyag-elemek (például vas) által.
Ezen mechanizmusok és tényezők közül sok, amelyek az állat testének mikroflórájának képviselőiben léteznek, kombinálva és kölcsönhatásba lépve egyfajta gáthatást hoznak létre - akadályozzák az opportunista és patogén mikroorganizmusok szaporodását az állat testének bizonyos területein. A makroorganizmus rezisztenciáját a kórokozók által okozott kolonizációval szemben, amelyet szokásos mikroflórája hoz létre, kolonizációs rezisztenciának nevezzük. Ezt a patogén mikroflóra kolonizációval szembeni ellenállást elsősorban a normál mikroflóra részét képező, szigorúan anaerob mikroorganizmusok hasznos fajainak komplexe hozza létre: a nemzetségek különböző képviselői - Bifidobacterium, Bacteroides, Eubacterium, Fusobacterium, Clostridium (nem patogén), mint valamint fakultatív anaerobok, például a Lactobacil-lus nemzetség, a nem patogén E. coli, S. faecalis, S. faecium és mások. A test normál mikroflórájának szigorúan anaerob képviselőinek ez a része dominál a populációk számát tekintve a teljes bél mikroflórában 95-99% között. Ezen okok miatt a test normál mikroflóráját gyakran az egészséges állat és ember testének nem specifikus ellenállásának további tényezőjének tekintik.
Nagyon fontos azoknak a feltételeknek a megteremtése és megfigyelése, amelyek között a normál mikroflórával rendelkező újszülött települése közvetlenül vagy közvetve kialakul. Állatorvosoknak, adminisztratív és gazdasági dolgozóknak, állattenyésztőknek kell megfelelően felkészíteniük az anyákat a szülésre, le kell vezetniük a szülést, biztosítaniuk kell az újszülöttek kolosztrummal és tejjel történő táplálását. Gondosan kell kezelni a születési csatorna normál mikroflórájának állapotát.
Az állatorvosoknak szem előtt kell tartaniuk, hogy az egészséges nőstények születési csatornájának normális mikroflórája a hasznos mikroorganizmusok fiziológiai alapú tenyésztése, amely meghatározza a leendő állat testének teljes mikroflórájának megfelelő fejlődését. Ha a szülés komplikációmentes, akkor a mikroflórát nem szabad megzavarni indokolatlan terápiás, megelőző és egyéb hatásokkal; kellően meggyőző bizonyíték nélkül ne vigyen be antiszeptikumokat a szülőcsatornába, használjon tudatosan antibiotikumot.
koncepcióról rőldiszbakteriózis
Vannak esetek, amikor a normál mikroflórában a fajok evolúciósan kialakult aránya megsérül, vagy a szervezet automikroflórájában a legfontosabb mikroorganizmuscsoportok közötti mennyiségi arányok megváltoznak, vagy maguknak a mikrobák képviselőinek minősége megváltozik. Ebben az esetben dysbacteriosis lép fel. Ez pedig utat nyit az automikroflóra kórokozó és opportunista képviselői előtt, amelyek behatolhatnak vagy elszaporodhatnak a szervezetben és betegségeket, működési zavarokat stb. bizonyos határok között visszafogja az állati szervezet automikroflóráját az opportunista részt.
A szervezet automikroflórájának morfofunkcionális szerepe és metabolikus funkciója
Az automikroflóra megszületése után úgy hat a makroorganizmusra, hogy hatása alatt számos, a külső környezettel érintkező szerv szerkezete és működése megérik és kialakul. Ily módon a gyomor-bélrendszer, a légzőszervek, az urogenitális traktusok és más szervek morfofunkcionális megjelenést nyernek egy felnőtt állatban. A biológiai pókok egy új területe, a gnotobiológia, amely L. Pasteur kora óta sikeresen fejlődik, lehetővé tette annak világos megértését, hogy egy felnőtt, normálisan fejlett állati szervezet számos immunbiológiai jellemzője az automikroflóra hatására alakul ki. a testét. A császármetszéssel nyert, majd hosszú ideig speciális steril gnotobibológiai izolátorokban, anélkül, hogy életképes mikroflórájuk hozzáférhetett volna a mikrobamentes állatok (gnotobioták) a nyálkahártya embrionális állapotának sajátosságai, amelyek kommunikálnak a nyálkahártya külső környezetével. szervek. Immunbiológiai állapotuk is megőrzi embrionális jellemzőit. Figyelje meg a limfoid szövet hipopláziáját ezeknek a szerveknek az első helyén. A mikrobamentes állatokban kevesebb immunkompetens sejtelem és immunglobulin van. Jellemző azonban, hogy egy ilyen gnotobiotikus állat szervezete potenciálisan képes marad immunbiológiai képességek kifejlesztésére, és csak a közönséges állatoknál (születéstől kezdve) az automikroflórából származó antigén ingerek hiánya miatt nem ment keresztül természetes úton. általánosságban az egész immunrendszert érintő fejlődés, valamint olyan szervek nyálkahártyájának helyi limfoid felhalmozódása, mint a belek, a légutak, a szem, az orr, a fül stb. Így az állati szervezet egyéni fejlődésének folyamatában, automikroflórájából erednek a hatások, beleértve az antigén ingereket is, amelyek meghatározzák egy közönséges felnőtt állat normális immunmorfofunkciós állapotát.
Az állati szervezet mikroflórája, különösen a gyomor-bél traktus mikroflórája fontos anyagcsere-funkciókat lát el a szervezet számára: befolyásolja a vékonybélben történő felszívódást, enzimjei részt vesznek az epesavak lebontásában és anyagcseréjében a bélben, és képződnek. szokatlan zsírsavak az emésztőrendszerben. A mikroflóra hatására a bélben a makroorganizmus egyes emésztőenzimeinek katabolizmusa megy végbe; enterokináz, alkalikus foszfatáz inaktiválódik, lebomlik, az emésztőrendszer egyes, funkcióját betöltött immunglobulinjai a vastagbélben lebomlanak, stb. A gyomor-bél traktus mikroflórája számos, a makroorganizmus számára szükséges vitamin szintézisében vesz részt. Képviselői (például számos típusú bakteroid, anaerob streptococcus stb.) enzimeikkel képesek lebontani az állati szervezet által önállóan megemészthetetlen rostokat, pektin anyagokat.
Néhány módszer az állati test mikroflórájának megfigyelésére
A mikroflóra állapotának nyomon követése adott állatokban vagy csoportjaikban lehetővé teszi a normál mikroflóra egy fontos őshonos részének nemkívánatos változásainak időben történő korrigálását, a hasznos baktériumok képviselőinek, például bifidobaktériumok vagy laktobacillusok stb. mesterséges bejuttatásából adódó jogsértések kijavítását, és megakadályozzák a diszbakteriózis kialakulását nagyon súlyos formákban. Az ilyen védekezés akkor kivitelezhető, ha a megfelelő időben mikrobiológiai vizsgálatokat végeznek a fajösszetételre és a mennyiségi arányokra, elsősorban az állat testének egyes területeinek autochton szigorúan anaerob mikroflórájában. Bakteriológiai vizsgálathoz a nyálkahártyából, a szervek tartalmából, vagy akár magának a szervnek a szövetéből vesznek nyálkát.
Anyagfelvétel. A vastagbél vizsgálatához speciálisan steril csövek - katéterek - vagy egyéb módon steril edényekben gyűjtött ürülék használható. Néha a gyomor-bél traktus vagy más szervek különböző részeinek tartalmát kell bevenni. Ez főleg az állatok levágása után lehetséges. Ily módon anyag nyerhető a jejunumból, nyombélből, gyomorból stb. A bélszakaszokat a tartalommal együtt véve lehetővé válik mind a tápcsatorna, mind a bélfal mikroflórájának meghatározása kaparék, homogenizátumok készítésével. a nyálkahártya vagy a bélfal. Az állatok vágás utáni anyagának felvétele lehetővé teszi az általános felső és középső légutak (légcső, hörgők stb.) normál mikroflórájának teljesebb és átfogóbb meghatározását is.
Kvantitatív kutatás. A különböző mikroorganizmusok mennyiségének meghatározásához az állatból így vagy úgy vett anyagból 9-10 tízszeres (10 1-től 10 10-ig terjedő) hígítást készítünk steril sóoldatban, vagy néhányat (a típusnak megfelelően). a mikroba) steril folyékony táptalaj. Ezután minden hígításból a kisebbtől a töményebbig kezdődően a megfelelő táptalajra vetik.
Mivel a vizsgált minták vegyes mikroflórájú biológiai szubsztrátok, a táptalajokat úgy kell megválasztani, hogy mindegyik kielégítse a kívánt mikroba nemzetség vagy faj növekedési igényeit, és egyidejűleg gátolja a többi kísérő mikroflóra növekedését. Ezért kívánatos, hogy a média szelektív legyen. A normál mikroflórában betöltött biológiai szerepe és jelentősége szerint az őshonos, szigorúan anaerob része fontosabb. Kimutatásának technikái megfelelő tápközeg és speciális anaerob termesztési módszerek használatán alapulnak; a fent felsorolt szigorúan anaerob mikroorganizmusok többsége tenyészthető új, dúsított és univerzális, 105. számú táptalajon A. K. Baltrashevich et al. (1978). Ez a táptalaj összetett összetételű, ezért sokféle mikroflóra növekedési igényeit képes kielégíteni. Ennek a környezetnek a receptje megtalálható a "A gnotobiológia elméleti és gyakorlati alapjai" című kézikönyvben (M.: Kolos, 1983). Ennek a tápközegnek a különféle változatai (steril vér hozzáadása nélkül, vérrel, sűrű, félfolyékony stb.) lehetővé teszik számos kötelező anaerob faj termesztését, anaerob körülmények között oxigén nélküli gázkeverékben és kívül anaerob körülmények között, félig. -105-ös közeg folyékony változata kémcsövekben.
Ezen a táptalajon bifidobaktériumok is szaporodnak, ha 1% laktózt adunk hozzá. A nem mindig elérhető komponensek rendkívül nagy száma és a 105. számú közeg összetett összetétele miatt azonban nehézségek adódhatnak a gyártás során. Ezért célszerűbb a Blaurock-féle táptalaj alkalmazása, amely nem kevésbé hatékony a bifidobaktériumokkal végzett munka során, de egyszerűbb és könnyebben előállítható (Goncharova G.I., 1968). Összetétele és elkészítése: májleves - 1000 ml, agar-agar - 0,75 g, pepton - 10 g, laktóz - 10 g, cisztin - 0,1 g, konyhai só (x / h) - 5 g. főzet: 500 g friss marhamájat apróra vágva, öntsünk 1 liter desztillált vizet és forraljuk 1 órán át; védje meg és szűrje át pamut-gézszűrőn, töltse fel desztillált vízzel az eredeti térfogatra. Ehhez a főzethez olvasztott agar-agart, peptont és cisztint adunk; állítsa be a pH-t 8,1-8,2 értékre 20%-os nátrium-hidroxiddal, és forralja 15 percig; 30 percig állni hagyjuk és szűrő. A szűrletet desztillált vízzel 1 literre melegítjük, és laktózt adunk hozzá. Ezután 10-15 ml-es kémcsövekbe öntjük, és folyó gőzzel frakcionáltan sterilizáljuk (Blokhina I.N., Voronin E.S. et al., 1990).
Annak érdekében, hogy ezeknek a tápközegeknek szelektív tulajdonságokat adjunk, megfelelő szereket kell bevezetni, amelyek gátolják más mikroflóra növekedését. Bakteroidok kimutatására - ez a neomicin, kanamicin; spirálisan ívelt baktériumokhoz (például bélspirochetákhoz) - spektinomicin; a Veillonella nemzetség anaerob coccusaira - vancomycin. A bifidobaktériumok és más gram-pozitív anaerobok izolálására a mikroflóra vegyes populációiból nátrium-azidot adnak a táptalajhoz.
Az anyagban lévő laktobacillusok mennyiségi meghatározásához Rogosa sós agart célszerű használni. Szelektív tulajdonságokat kölcsönöz neki ecetsav hozzáadása, amely pH = 5,4-et eredményez ebben a közegben.
A laktobacillusok számára nem szelektív táptalaj lehet a tej krétával készült hidrolizátuma: egy liter pasztőrözött, fölözött tejhez (pH -7,4-7,6), amely nem tartalmaz antibiotikum-szennyeződéseket, adjunk hozzá 1 g pankreatinport és 5 ml kloroformot; rendszeresen rázza fel; 72 órára termosztátba tesszük 40 °C-on. Ezután leszűrjük, pH = 7,0-7,2 értékre állítjuk és 1 atm nyomáson sterilizáljuk. 10 perc. A kapott hidrolizátumot vízzel 1:2 arányban hígítjuk, hozzáadunk 45 g hővel sterilizált krétaport és 1,5-2% agar-agart, addig melegítjük, amíg az agar megolvad, majd autoklávban újra sterilizáljuk. Használat előtt a közeget ferde. Adott esetben bármilyen szelekciós szer adható a táptalajhoz.
Lehetőség van a staphylococcusok azonosítására és szintjének meghatározására egy meglehetősen egyszerű táptalajon - glükózsó hús-pepton agar (MPA 10% sóval és 1-2% glükózzal); enterobaktériumok - Endo táptalajon és más táptalajokon, amelyek előírásai megtalálhatók bármely mikrobiológiai kézikönyvben; élesztő és gombák – Sabouraud táptalajon. Az aktinomicétákat célszerű Krasilnikov-féle SR-1 táptalajon kimutatni, amely 0,5 db kétbázisú kálium-foszfátot tartalmaz. 0,5 g magnézium-szulfát, 0,5 g nátrium-klorid, 1,0 g kálium-nitrát, 0,01 g vas-szulfát, 2 g kalcium-karbonát, 20 g keményítő, 15-20 g agar-agar és legfeljebb 1 liter desztillált víz . Oldjuk fel az összes összetevőt, keverjük össze, melegítsük, amíg az agar elolvad, állítsuk be a pH-t = 7, szűrjük, öntsük kémcsövekbe, sterilizáljuk autoklávban 0,5 atm-en. 15 perc, vetés előtt nyírni.
Az enterococcusok kimutatására szelektív táptalaj (agar-M) kívánatos a következő összetételű egyszerűsített változatban: 1 liter olvadt steril MPA-hoz adjunk 4 g diszubsztituált foszfátot minimális mennyiségű steril desztillált vízben oldva, 400 mg szintén feloldott. nátrium-aeid; 2 g oldott glükóz (vagy 40% -os glükóz steril oldata - 5 ml). Mozgass mindent. Miután az elegy körülbelül 50 °C-ra lehűlt, adjunk hozzá 100 mg TTX-t (2,3,5-trifenil-tetrazolium-klorid) steril desztillált vízben oldva. Keverje össze, ne sterilizálja a táptalajt, azonnal öntse steril Petri-csészékbe vagy kémcsövekbe. Az entero coccusok ezen a táptalajon kicsi, szürkésfehér telepekként nőnek. De gyakrabban a TTX keveredése miatt az euterococcusok kolóniái sötét cseresznyeszínt kapnak (a teljes kolónia vagy annak központja).
A spórás aerob rudak (B. subtilis és mások) könnyen azonosíthatók, miután a vizsgált anyagot 80 °C-on 30 percig melegítik. Ezután a felmelegített anyagot sem MPA-val, sem 1MPB-vel nem vetik be, és a szokásos inkubációt követően (37 °C, oxigénhez jutva) ezeknek a bacilusoknak a jelenlétét a táptalaj felületén, film formájában történő növekedésük határozza meg. az MPB-n).
Az állat testének különböző területeiről származó anyagokban lévő corynebaktériumok számát Buchin táptalaj segítségével lehet meghatározni (kész formában a Dagestan Institute of Dry Nutrient Media cégtől). Akár 5% steril vérrel dúsítható. A Neisseria kimutatása Bergea risztomicint tartalmazó táptalajon történik: adjunk 1% desztillált vízben sterilen oldott maltózt 1 liter olvadt Hottinger agarhoz (kevésbé kívánatos MPA) (10 g maltózt minimális mennyiségű vízben fel lehet oldani és vízfürdőben felforralni ), 15 ml 2%-os vizes kék (anilinkék vízoldható) oldata, risztomicin oldata; számítás 6,25 egység. 1 ml táptalajra. Keverjük össze, ne sterilizáljuk, öntsük steril Petri-csészékbe vagy kémcsövekbe. A Neisseria nemzetség gram-negatív coccusai kis és közepes méretű, kék vagy kék színű telepek formájában nőnek. A Hemophilus baktériumokat csokoládéagar (lóvérből) táptalajon izolálhatjuk bacitracin szelektív szerrel. .
Módszerek feltételesen patogén mikroorganizmusok (Pseudomonas aeruginosa, Proteus, Klebsiella stb.) kimutatására. Jól ismert vagy a legtöbb bakteriológiai kézikönyvben megtalálható.
IRODALOM
Alapvető
Baltrashevich A. K. et al. Sűrű, vér nélküli tápközeg és félig folyékony és folyékony változatai bakteroidok tenyésztéséhez / A Szovjetunió Orvostudományi Akadémia Kísérleti Biológiai Modellei Tudományos Kutatólaboratóriuma. M. 1978 7 p. Bibliográfia 7 cím Dep. VNIIMI 7.10.78., 1823. D. sz.
Goncharova G. I. A B. bifidum termesztési módszeréhez // Laboratóriumi üzlet. 1968. № 2. S. 100-1 D 2.
Útmutató az opportunista enterobaktériumok és szalmonellák izolálásához és azonosításához fiatal haszonállatok akut bélbetegségeiben / E. N. Blokhina, S. Voronin et al. KhM: MVA, 1990. 32 p.
Petrovskaya V. G., Marko O. P. Emberi mikroflóra normál és patológiás körülmények között. Moszkva: Orvostudomány, 1976. 221 p.
Chakhava O. V. és munkatársai: A gnotobiológia mikrobiológiai és immunológiai alapjai. Moszkva: Orvostudomány, 1982. 159. o.
Knothe H. u. a. Vaginales Keimspektrum//FAC: Fortschr. antimlkrob, u. Antirieoplasztikus kemoterápia. 1987. Bd. 6-2. S. 233-236.
Koopman Y. P. et al. Associtidn of germ-free rats with different rnicrofloras // Zeitschrift fur Versuchstierkunde. 1984. Bd. 26., 2. sz. S. 49-55.
Varel V. H. Rostbontó mikroorganizmusok aktivitása sertés vastagbélben//J. Anim. Tudomány. 1987. V. 65, N 2. P. 488-496.
További
Boyd M. E. Posztoperatív nőgyógyászati fertőzések//Can. J. Surg. 1987.
V. 30., 'N 1. P. 7-9.
Masfari A. N., Duerden B, L, Kirighorn G. R. A hüvelyi baktériumok kvantitatív vizsgálatai//Genitourin. Med. 1986. V. 62, N 4. P. 256-263.
Methods for quantitative and assessment of qualitative of vaginal micro-fiora during menstruation / A. B. Onderdonk, G. A. Zamarchi, Y. A. Walsh et al. //Alk. és Environ. mikrobiológia. 1936. V. 51, N 2. P. 333-339.
Miller J. M., Pastorek J. G. A membránok idő előtti szakadásának mikrobiológiája//Clin. obstet. és Gyriecol. 1986. V. 29, N 4. P. 739-757.
Születés után az állat teste érintkezésbe kerül különféle mikroorganizmusokkal, amelyek áthatolnak a légzőrendszeren és az emésztőrendszeren, és megtelepednek a gyomor-bélrendszerben, a nemi szervekben és más szervekben. Az állatok testének állandó lakói mikroorganizmusok, amelyek egy része obligát mikroflóra, mások átmenetileg vannak a szervezetben, a talajból, levegőből, vízből és takarmányból jutva.
A bőr mikroflóra. A bőr állandó lakói - staphylococcusok, streptococcusok, sarcinok, aktinomyceták, mikrococcusok, amelyek gennyes folyamatokat okoznak: kelések, tályogok, flegmon stb.
A rúd alakú formák közül bél, pseudomonas, pseudodiphtheria található. Az aerobok és anaerobok csoportjába tartozó mikrobák is a bőrre kerülnek. A bőrön lévő mikrobák száma az állatok tartási körülményeitől függ: rossz gondozás mellett akár 1-2 milliárd mikrobatest is megtalálható a bőrfelület 1 cm-én.
Tőgy mikroflóra. A tőgy mikroflórája főleg mikrococcusokból (M. luteus, M. flavus, M. candidus, M. caseolyticus), staphylococcusokból, streptococcusokból, corynebacteriumokból, különösen Corynebacterium bovisból áll. A durva és kis redők jelenléte miatt a tőgy külső bőre szinte minden olyan mikroba felhalmozódási helye, amely állattartó épületekben, legelőkön, almokban, takarmányban, tejeslány kezén és egyéb környezeti tárgyakon él. A helyiségek elégtelen tisztítása és fertőtlenítése esetén a tőgybőr 1 cm-én általában több mint 10 mikrobát találnak, aminek következtében a tőgy a termelt tej egyik fő szennyeződési forrásává válhat.
A tőgy bőrén található kórokozó mikrobák közül gyakran előfordulnak a tőgygyulladás kórokozói (Str. agalactiae, Str. uberis, Staph. aurcus) és a vastagbélgyulladás (Escherichia coli, Klebsiella aerogenes, Corynebacterium pyogencs, Vas. subtilis, Pseudomonas aerugynosa stb.). megtalált. Str. különösen fontos. agalactiae, amely az összes bakteriális tőgygyulladás 70-80%-át okozza.
A kötőhártya mikroflórája. A kötőhártyán viszonylag kis számú mikroba található. Általában ezek a staphylococcusok, streptococcusok, szardínia, mikoplazmák, mikrococcusok, aktinomikéták, élesztők és penészgombák, amelyek kevésbé gyakoriak.
A légutak mikroflórája. Az újszülött állatok légutaiban nincsenek mikroorganizmusok. A felső légutak nyálkahártyájára lélegezve lerakódnak a levegőből különféle baktériumok, aktinomikéták, penész- és élesztőgombák, mikoplazmák stb. A nasopharynx, a torok nyálkahártyájának állandó lakói elsősorban a baktériumok coccalis formái - streptococcusok, staphylococcusok, mikrokokkuszok.
A tápcsatorna mikroflórája. Ő a legbőségesebb. Újszülött állatoknál a gyomor-bél traktus nem tartalmaz mikrobákat. Néhány óra elteltével az állat testét benépesíti a mikroflóra, amely az élet során változhat, de alapvetően az állat élete végéig stabil marad. Az emésztőcsatorna mikroflórája általában fakultatívra oszlik, amely a takarmányozástól, a karbantartási és üzemeltetési feltételektől függően változhat, valamint kötelező, azaz. állandó, alkalmazkodik a gyomor-bél traktus környezeti viszonyaihoz. Az állandó mikroflóra közé tartoznak a tejsav streptococcusok (Sir. lactis), tejsavrudak (Bad. acidophilum), Escherichia coli (E. coli).
A szájüreg mikroflórája. Ez a legbőségesebb és legváltozatosabb. A szájüregben több mint 100 féle mikroorganizmust találtak. A szájüreg állandó lakói közé tartoznak a diplococcusok, staphylococcusok, szardíniák, mikrococcusok, difteroidok, anaerobok és aerobok, cellulózromboló baktériumok, spirocheták, gombák, élesztőgombák stb.
A mikroorganizmusok sokfélesége függ az állat típusától, a takarmány típusától és felhasználásuk módjától. Például tejjel tápláláskor a tejsavmikrobák és a tejmikroflóra érvényesül. Növényevők szálastakarmányozásakor a szájüregben kicsi a mikrobák száma, zamatos takarmányozáskor pedig 10-szeresére nő.
A gyomor mikroflórája. Mind mennyiségi, mind minőségi összetételében viszonylag gyenge. Ezt a savas gyomornedv baktériumölő hatása magyarázza. A gyomor tartalmában a spóra típusú Bac fennmarad. subtilis, saválló mikobaktériumok (M. bovis, M. avium), valamint a sarcina (Sarcina ve; ntriculi), tejsavbaktériumok, aktinomikéták, enterococcusok stb.
A savasság csökkenésével, valamint a gyomorbetegséggel a rothadó baktériumok, élesztőgombák, gombák, penészgombák és más mikroorganizmusok gazdag mikroflórája található a tartalmában.
A sertés gyomrában a mikroflóra fő képviselői a tejsavbaktériumok, a szénhidrátokat fermentáló különféle coccusok, az aktinomicéták, az élesztőgombák, a spóraképző aerobok; Cl található. perfringens. A ló gyomrának mikroflórája számosabb és változatosabb: a pylorushoz közelebb szegényes, a gyomor előcsarnokában nagy számban koncentrálódnak a mikrobák; a gyomor alján sok tejsavbaktérium található, rothadók nincsenek.
A kérődzők bendőjének mikroflórája gazdagabb. Sok a rothadó baktérium, a különféle fermentációk kórokozója. A táplálékkal rengeteg különféle epifita és talaj mikroflóra kerül a bendőbe. Főleg vegetatív formában találhatók, számuk 1000-10 millió mikrobatest, egyes források szerint akár több tízmilliárd is lehet a heg tartalmának 1 ml-ében.
A kérődzők bendőjében összetett mikrobiológiai és biokémiai folyamatok mennek végbe, amelyek a lebomlással járnak tápanyagok. Különösen érdekesek a cellulózpusztító mikrobák: Ruminococcus flavcfaciens, R. albus, Bact. succinogenes, Cl. cellobioparum, Cl. cellolyticum stb. Ezek a mikroorganizmusok a rostokat a cellulóz enzim segítségével glükózzá emésztik, amelyet az állati szervezet könnyen felszív. A pektinek lebontják. macerans, Vas. asterosporus, Amylobacter, Granulobacter pectinovorum. A streptococcusok (Str. bovis, Str. faecalis stb.) tejsav képződésével erjesztik a keményítőt, a glükózt. A propionsavbaktériumok (Propionipcctinovorum, VeilloneUa, Peptosfreptococcus elsdenii, Butyribacterium, E. coli stb.) propionsav, részben vaj- és ecetsav képződéssel fermentálják a laktátokat, B-vitaminokat termelnek A bendőben élő mikrobák fehérjéket, nitrátokat, A karbamid szintetizálja az összes vitamint, kivéve A, E, D.
A vékonybél mikroflórája. Ő a legszegényebb. A nyombélben és a jejunumban a cellulóz mikroorganizmusok aktivitása gyengül. Itt leggyakrabban eperezisztens enterococcusok, acidofil, spóra mikrobák (Bac. retiformis, Cl. perfringens), aktinomyceták, E. coli stb. élnek. A vékonybél mikroflórájának mennyiségi és minőségi összetétele az állatfajtától, ill. táplálkozásuk jellege.
A vastagbél mikroflórája. Ő a leggazdagabb. Állandó lakosok - enterococcusok, staphylococcusok, streptococcusok, cellulózbaktériumok, aktinomikéták, acidofilek, termofilek, spóraformák, élesztők, penészgombák, rothadó baktériumok. A mikroorganizmusok bősége a vastagbélben annak köszönhető, hogy nagy mennyiségű megemésztett élelmiszer van bennük. Megállapítást nyert, hogy az emberi széklet szárazanyagának egyharmada mikrobákból áll. A vastagbélben a mikrobiológiai folyamatok nem állnak le, a mikrobiális tevékenység számos terméke felszívódik a makroorganizmusban. Különböző állatfajokban, beleértve a madarakat, a méheket is, a vastagbél mikroflóráját a mikrobák különféle társulásai képviselik, amelyek lehetnek állandóak és nem állandósak.
Egészséges állatokban, a normál mikroflórával együtt, bizonyos esetekben patogén mikroorganizmusokat találnak - tetanusz kórokozói, kancák fertőző vetélése, lépfene, sertés erysipelas, pastsrellosis, szalmonellózis, anaerob és egyéb fertőzések.
A húgyúti szervek mikroflórája. A nemi szervek nyálkahártyáján staphylococcusok, streptococcusok, mikrococcusok, difteroidok, saválló mikobaktériumok (Mus. smegmae) stb. találhatók.. A hüvelynyálkahártya fő lakója a Bact. vaginale vulgare, amely kifejezett antagonizmust mutat más mikroorganizmusokkal szemben. A húgyutak fiziológiás állapotában a mikroflóra csak a külső részeikben található.
A méh, a petefészkek, a herék, a húgyhólyag fiziológiás állapotban sterilek. Az urogenitális szervek betegségei (metritis, endometritis) esetén a hüvelyi mikroflóra megváltozik.
Így az állatok testének felszíne, nyitott és zárt üregei folyamatosan változatos, többnyire ártalmatlan, de esetenként patogén mikroflórát tartalmaznak. Normál körülmények között bizonyos jótékony mikrobiocenózis fennmarad a szervezetben. A makroorganizmus rezisztenciájának csökkenésével a gyorsan fejlődő, feltételesen patogén mikroorganizmusok betegségeket (tüdőgyulladás, enteritis stb.) okoznak.
A MIKROORGANIZMUSOK KAPCSOLATAI EMBEREKKEL ÉS ÁLLATOKKAL
A MIKROORGANIZMUSOK KAPCSOLATAI NÖVÉNYEKKEL
A rizoszféra mikroflórája. A növényeket izolálják külső környezet különféle szerves vegyületek - cukrok, szerves savak, nukleotidok, aminosavak, vitaminok, növekedésserkentők, amelyek könnyen hozzáférhető és nagyon változatos szubsztrátjai a mikrobiális táplálkozásnak. Ezért nem véletlen, hogy a növények gyökérrendszerét és talajszerveit bőven népesítik be mikroorganizmusok. A rizoszféra mikroflórája viszont, amely részt vesz a talaj szerves anyagainak átalakulási folyamataiban, biztosítja a növényeket az ásványi táplálkozás szükséges elemeivel, valamint néhány biológiailag aktív anyaggal. Ezenkívül a rizoszféra mikroorganizmusai számos, a növényekre mérgező vegyületet lebontanak, fertőtlenítve a talajt. A növények és baktériumok kölcsönös befolyásának mértékét az érintkezésük határozza meg.
Fitopatogén mikroorganizmusok. A mikroorganizmusok szinte minden csoportja tartalmaz növényi kórokozókat. A fitopatogén mikrobák között az első helyen a gombák állnak, a második helyet a vírusok és baktériumok foglalják el, és a növényi betegségeknek csak kis százalékát az aktinomicéták okozzák.
A legtöbb fitopatogén mikroorganizmus aktívan szintetizál hidrolitikus enzimeket (pektipázokat, cellulázokat, proteázokat stb.), amelyek a növényi szövetek macerációját és a sejtmembránok pusztulását okozzák, ami a kórokozó behatolásához vezet a sejtbe. A sejtbe jutva a fitopatogén mikrobák megzavarják a fiziológiai folyamatok normális lefolyását, elsősorban a fotoszintézist és a légzést. A kórokozó által felszabaduló toxinok inaktiválják a növényi sejt enzimjeit, ami végső soron a sejt pusztulásához vezet.
Az emberi és állati szervezetben az élethez alkalmazkodó, a makroorganizmus élettani funkcióiban semmilyen zavart nem okozó mikroorganizmusok összességét ún. normál mikroflóra.
Az emberek és állatok normál mikroflórája a kötelezés választható. Az obligát mikroflóra viszonylag állandó szaprofita és feltételesen patogén mikroorganizmusokat foglal magában, amelyek maximálisan alkalmazkodnak a gazdaszervezetben való létezéshez. A fakultatív mikroflóra véletlenszerű és átmeneti. A környezetből származó mikroorganizmusok bevitele, valamint a makroorganizmus immunrendszerének állapota határozza meg.
Az emberek és állatok szájüregében a baktériumok nagy része plakkokban lokalizálódik. 1 g száraz tömegű plakk legalább 250 millió mikrobasejtet tartalmaz.
A mikroorganizmusok szinte hiányoznak az emberi gyomorban, ami a gyomornedv és a savas pH baktériumölő hatásának köszönhető.
Viszonylag kevés baktérium (10 2 -10 ^) él a vékonybélben, főleg aerob formák. A vastagbélben azonban óriási számú mikroba található, köztük több mint 260 különböző típusú fakultatív és kötelező anaerob.
A környező levegőből a porral együtt rengeteg mikroba kerül az emberek és állatok légzőrendszerébe. A hám védő funkciója, valamint az orrnyálkahártya lizozim és mucin baktériumölő hatása miatt a mikroorganizmusok többsége a felső légutakban marad vissza. A tüdő hörgői és alveolusai gyakorlatilag sterilek. A felső légutak mikroflórájának összetétele viszonylag állandó mikrobákat tartalmaz, amelyeket staphylococcusok, corynebacteriumok, streptococcusok, bakteroidok, kapszuláris Gram-negatív baktériumok stb.
A bőr felszínén lévő baktériumok táplálásának szubsztrátuma a verejték- és faggyúmirigyek váladéka, valamint a haldokló hámsejtek. A nyitott testrészek - kéz, arc, nyak - bőre a leggazdagabb mikroorganizmusokban. A bőr mikroorganizmusainak túlnyomó tömegét szaprofita baktériumok - staphylococcusok, bacilusok, mikobaktériumok, korinebaktériumok és élesztőgombák - képviselik, és az elemzések mindössze 5% -a tár fel feltételesen patogén mikrobát - Staphylococcus aureust.
Az emberek és állatok normális mikroflórája fontos szerepet játszik a természetes immunitás kialakulásában. Megállapítást nyert, hogy az olyan obligát mikroorganizmusok, amelyek olyan anyagokat termelnek, mint az antibiotikumok, tejsav, alkoholok, hidrogén-peroxid és más vegyületek, kifejezett antagonista tulajdonságokkal rendelkeznek számos patogén baktériummal szemben. Az emberi szervezetben a mikroboyenózisok összetételének minőségi és mennyiségi rendellenességeit ún. diszbakteriózis. Ez utóbbi leggyakrabban az antibiotikumok hosszan tartó alkalmazása, valamint krónikus fertőzések, sugárzás és szélsőséges tényezők hatására fordul elő. A dysbacteriosis kialakulását a makroorganizmus obligát mikroflórájának elnyomása, és ennek megfelelően az opportunista baktériumok (Proteus, Pseudomonas) és élesztőgombák Candida albicans aktív szaporodása magyarázza.
